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目的:基于转录组对广藿香中JAZ(JASMONATE ZIM-domain)家族关键蛋白挖掘,进行初步的生物信息学分析、克隆和表征;系统鉴定广藿香PcJAZ6,分析其外源茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)诱导表达模式;检测下游转录因子与其的蛋白互作,借助瞬时过表达对广藿香醇生物合成的影响进行初步分析;构建广藿香中病毒诱导的基因沉默技术(Virus-induced Gene Silencing,VIGS),进行PcJAZ6基因调控PcPTS表达和广藿香醇合成的功能验证。方法:1.通过300 μM MeJA喷施广藿香幼苗8 h,提取RNA进行转录组测序,并挖掘广藿香JAZ家族关键蛋白,对其进行克隆和表征。2.利用MEGA和DNAMAN软件对PcAZ6进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR法(real-time q-PCR)检测MeJA处理植株后PcJAZ6的表达量,分析不同处理时间的响应变化,并利用原生质体系统对其进行亚细胞定位研究。3.通过酵母双杂交法(Yeast two-hybrid,Y2H)和萤火虫荧光素酶互补成像分析实验(Firefly Luciferase Complementation Imaging Assay,LCI)验证与 PcJAZ6 互作的转录因子。利用原植物瞬时过表达技术检测分析PcJAZ6调节广藿香醇合酶基因表达的作用,并利用气相色谱-质谱仪(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)检测广藿香醇含量的变化,进行初步功能分析。4.利用TRV病毒和PcPDS基因,构建广藿香中VIGS技术,通过该技术快速沉默PcJAZ6基因,并对其参与基因表达和广藿香醇合成进程进行功能验证。成果:在本研究中,我们通过转录组数据鉴定到6个JAZ蛋白,PcJAZ3、PcJAZ4、PcJAZ6、PcJAZ7、PcJAZ10和PcJAZ11,并得到基因克隆和蛋白表征。系统克隆并鉴定了广藿香PcJAZ6蛋白,结果发现其定位于细胞核内,基因表达水平受到外源MeJA的诱导上调。PcJAZ6与转录因子PcMYC2b1和PcMYC2b2存在互作,过表达PcJAZ6减少广藿香醇的生物合成。建立并评估了广藿香中病毒诱导的基因沉默体系,利用TRV病毒载体,以广藿香内源PcPDS基因作为指示,沉默42天后检测到基因表达量下降,并观察到叶片白化表型。基于VIGS病毒诱导的PcJAZ6基因沉默,与对照相比PcJAZ6的相对表达水平明显下调,而PcPTS的表达上调了约80%。而且与PcJAZ6相互作用的转录因子PcMYC2b1和PcMYC2b2的相对表达均出现增加,导致广藿香醇的合成积累显著提高。基于此,绘制广藿香植物PcJAZ6参与JA信号介导调控广藿香醇合成的机制模式图。结论:首次在广藿香中分离鉴定了 JA信号通路的JAZ家族蛋白:PcJAZ6。PcJAZ6基因表达受到MeJA强烈诱导。PcJAZ6定位于细胞核,证实PcJAZ6在酵母系统和植物中与PcMYC2b1和PcMYC2b2存在明显的相互作用。广藿香原植物瞬时过表达PcJAZ6导致PcPTS,PcMYC2b1和PcMYC2b2的表达均出现不同程度的降低,以致减少了广藿香醇的积累。成功建立并评估广藿香VIGS技术体系,应用于PcJAZ6的基因沉默,结果导致广藿香醇含量显著提高。综上,PcJAZ6作为阻遏蛋白抑制转录因子PcMYC2b1/PcMYC2b2活性,调控下游PcPTS基因表达,进而影响JA信号介导的广藿香醇合成过程。