H9亚型禽流感病毒(重庆株)的分离鉴定及疫苗研究

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禽流感(Avian Influenza,AI),是由禽流感病毒引起的一种急性烈性传染病,可以引起禽类的大量死亡,是危害禽养殖业最严重的疫病。近年来,禽流感病毒宿主范围扩大,向人等哺乳动物转移。尽管各国为应对禽流感投入了大量的人力财力,禽流感病毒感染人并致死的事件却不断发生并有逐年上升的趋势。禽流感对公共卫生和人民的生命财产的威胁在变大,有效的控制禽流感的发生成为人们亟待解决的难题。禽流感的传染源为带毒的禽类,感染禽流感的人也多是与禽有密切接触的者。因此,有效的控制养殖业中禽流感的发生,不仅能够为禽类养殖业的健康发展提供保障,同时也可以大大降低禽流感病毒感染人的几率。是从根源上控制禽流感感染人的最直接最有效的途径。禽流感病毒变异非常快,给禽流感防控带来困难,治疗性药物的研发进展十分缓慢,能够用于临床的药物寥寥无几且效果有限。接种疫苗是防控禽流感的主要手段。疫苗可以有效的预防禽流感病毒对养殖业的威胁,显著减少病毒在动物及环境中的数量,是禽流感防控的主要措施、关键环节和最后防线。但是,目前仍无新型疫苗可以应用于临床。传统的灭活疫苗,虽然免疫效果确切,但是由于禽流感病毒变异快,流行毒株多,血清型多且无交叉免疫。其作用大大受到限制。解决这一难题,有赖于对本地区流行的毒株的流行特点,变异特点进行研究以及合适的优秀疫苗毒株的筛选,以使禽流感的防控更具有针对性、效果更好。本课题从多次发生疫情的某地区一大型蛋鸡养殖场分离到一株病毒,该毒株血凝效价高首次分离其血凝价即可达到9lg2,分别用禽流感H9、H7、H5及新城疫标准血清做血凝抑制(HI)实验,血凝性可以被H9亚型禽流感标准血清抑制。初步鉴定出为禽流感病毒H9亚型。提取病毒RNA并将其反转录成为cDNA模板,PCR方扩增禽流感病毒M蛋白、NA蛋白、H9亚型禽流感HA蛋白基因,均扩增到目的条带,进一步确认为禽流感H9N2亚型。以该毒株为抗原,制备油乳佐剂疫苗,动物实验表明该毒株制备的疫苗,可以有效控制该病毒的攻击,很好地控制本地养殖场禽流感的发生。与市场上现有疫苗相比,其具有免疫原性强,免疫时间长,预防效果好的优点。是潜在的优良的疫苗备选毒株。
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