细胞蜡块在晚期非小细胞肺癌的病理诊断及分子检测中的应用研究

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目的:  探讨细胞蜡块在非小细胞肺癌患者中病理诊断及分子检测中的应用价值及临床意义。  方法:  收集2014年1月~2017年6月九江市第一人民医院收治30例确诊非小细胞肺癌(未经放化疗)并伴有恶性胸水的患者,记录患者的性别、年龄、及胸腔积液颜色、透明度、性质。胸水制作一张液基细胞涂片后进行形态学观察,剩余胸水离心获取肿瘤细胞沉渣制作细胞蜡块。分组:实验分为两组,实验组为非小细胞肺癌胸水细胞蜡块,对照组为其相对应的组织活检标本。用免疫组织化学方法检测细胞角蛋白7(Cell Keratin7,CK7)、p40(Delta-Np63)、天冬氨酸肽酶A( Aspartic peptidase A,NapsinA)、甲状腺转录因子-1(Thyroid transcription factor-1,TTF-1)、神经细胞黏附分子(Neural cell adhesion molecules,CD56)、突触素(Synaptothysin,Syn)、嗜铬素A(Chromogranin A,CgA)、p63、钙网膜蛋白(Calretinin,CR)在两组中的表达情况,并对比分析细胞蜡块与其对应组织活检标本免疫标记表达差异。免疫组织化学分型后,采用基于实时荧光定量PCR的扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)法检测表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)基因18、19、20、21号外显子突变状态,分析不同类型肺癌的基因突变的情况,并对比分析两种类型标本EGFR突变差异。采用SPSS18.0软件对收集的数据进行统计分析,组织活检标本与胸水细胞蜡块标本的EGFR基因突变率的差异运用X2检验方法比较,以P值>0.05表示差异具无统计学意义。  结果:  (1)免疫组织化学检测结果:同一患者的组织活检标本和胸水细胞蜡块的各种免疫组织化学标记的表达情况基本一致。  (2)ARMS法检测EGFR突变结果:30例肺癌组织活检标本EGFR的突变率为46.7%(14/30),在14例检测到EGFR基因突变的标本中,包括8例(68.8%)19外显子缺失突变;6例(31.2%)21外显子点突变L858R;未检出18外显子G719X突变、20外显子T790M突变。而与之对应的胸水细胞蜡块EGFR基因突变检测阳性率为43.3%(13/30)。在13例检测到EGFR基因突变的标本中,包括8例(61.5%)第19外显子缺失突变;5例(38.5%)第21外显子点突变L858R;未检出18外显子G719X、20外显子T790M突变。运用SPSS.18.0软件行X2检验,得出X2=0.067,P=0.795>0.05。表明运用ARMS法分别检测组织活检标本与胸水细胞蜡块的EGFR突变率差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  (1)实验组和对照组的免疫组织化学表达情况基本一致,提示细胞蜡块联合免疫组化对肺癌的病理诊断、分型有重要的价值。  (2)用ARMS法检测实验组和对照组EGFR基因突变率差异无统计学差异,提示细胞蜡块可以为晚期非小细胞肺癌分子检测提供标本来源,为临床晚期非小细胞肺癌的靶向治疗提供实验依据。
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