【摘 要】
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Hafnia alvei H4,已被证明含有lux I/lux R型群体感应系统(QS)且以N-酰基-1-高丝氨酸内酯(AHL)作为信号分子,该菌QS效应与即食海参的变腐过程相关。研究Hafnia alvei H4群体感应调节基因对AHL的影响对于推进即食海参的保藏工作是必要的。本文对Hafnia alvei H4进行测序并对得到的基因组扫描图进行分析,通过对基因组数据进行组装、预测、功能注释以及
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Hafnia alvei H4,已被证明含有lux I/lux R型群体感应系统(QS)且以N-酰基-1-高丝氨酸内酯(AHL)作为信号分子,该菌QS效应与即食海参的变腐过程相关。研究Hafnia alvei H4群体感应调节基因对AHL的影响对于推进即食海参的保藏工作是必要的。本文对Hafnia alvei H4进行测序并对得到的基因组扫描图进行分析,通过对基因组数据进行组装、预测、功能注释以及对代谢系统、致病系统等进行预测,为后期的转录组分析奠定了基础;并使用薄层色谱(TLC)分析了Hafnia alvei H4及其不同处理菌株产生AHLs的类型、高分辨率三重四极杆液相色谱/质谱(LC/MS)对产生AHLs进行定量,又通过转录组测序(RNA-seq)比较了Hafnia alvei H4的野生型菌株和lux I/R双突变体(Δlux IR)。结果如下,TLC和LC/MS实验研究表明Hafnia alvei H4会产生三种主要的AHL,N-丁酰基-1-高丝氨酸内酯(C4-HSL),N-己基-1-高丝氨酸内酯(C6-HSL)和N-(3-氧代辛酰基)-1-高丝氨酸内酯(3-oxo-C8-HSL),其中C6-HSL含量在三者中所占比例最大。在lux I突变体(Δlux I)的培养物中未检测到C6-HSL,在lux R突变体(Δlux R)的培养物中发现了更高水平的C4-HSL,这表明lux R基因可能对C4-HSL产生正效应。还发现AHL与QS基因在lux IR双基因缺失的情况下也密切相关。除此之外,基因组测序结果还对基因组组装与预测结果进行说明,对基因功能包括COG、GO及KEGG等多种功能进行注释、对可移动元件包括基因组岛及CRISPR-Cas进行分析以及对于代谢系统、致病系统等多方面进行了预测,这不仅有利于研究Hafnia alvei H4菌本身的基本生命过程,同时也为进一步研究Hafnia alvei H4菌可能参与的多种机制提供了参考和平台。转录组学分析表明,Hafnia alvei H4在AHL介导的QS中共差异表达了3197个基因,涉及糖酵解/糖异生、苯丙氨酸代谢等通路的调控,而在lux I/R介导的QS时共差异表达了865个基因,参与调控磷酸戊糖途径、组氨酸代谢等路径。两者介导的QS共同差异表达756个基因,共同参与调控三羧酸循环、趋化性等。
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