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双生病毒(Geminivirus)是一类具备孪生颗粒的单链环状DNA病毒,在世界范围内普遍发生,而且已经在许多国家的经济作物上造成毁灭性的危害。自20世纪90年代起,多种双生病毒已经在中国的云南、广东、广西、海南和福建等地的番茄、烟草、番木瓜等作物上相继发现。本研究主要以番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)及其伴随卫星和中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curl China virus, PaLCuCNV)为主要研究对象,对山东省、河南省番茄主产区展开系统调查,明确了TYLCV与PaLCuCNV的分布情况,以及确定了伴随TYLCV的卫星分子。通过提取典型症状样品总DNA利用粉虱传双生病毒简并引物PA/PB,进行PCR扩增得到535 bp的特异条带。然后利用TYLCV的全长引物(TY1-F/R、TY2-F/R和TY3-F/R)对阳性样本进行扩增。研究结果表明,在河南省安阳市、郑州市、焦作市以及山东省的潍坊市、临沂市、聊城市、烟台市和日照市通过PCR共得到16条TYLCV的全长核苷酸序列。通过测序和核苷酸序列比对表明这些序列与山东潍坊的TYLCV (SDWF-TYLCV)序列一致性最高为99.1%。根据已构建的系统进化树分析得到河南、山东的TYLCV分离物与番茄黄化曲叶病毒以色列(TYCV-IL)株系的分离物聚类在同一分支上,说明河南、山东TYLCV分离物属于TYLCV-IL株系。对感染TYLCV的阳性样品利用PaLCuCNV全长特异引物Fxyw-F/Fxyw-R进行检测得到2749 bp的核苷酸序列。在河南省郑州市、焦作市、安阳市筛选出7株TYLCV和PaLCuCNV复合侵染的阳性样品。同时利用双生病毒卫星分子DNAP特异引物β01／p02对TYLCV阳性样品进行DNAP检测,结果发现河南焦作市可以扩增出约1.3 kb的特异性条带。经序列比对,本研究发现此卫星与越南番茄黄化曲叶病毒卫星DNAβ (Tomato yellow leaf curl Vietnam betasatellite, TYLCVNB)分子的一致率最高,为89.7%,表明河南省TYLCV分离物中含有这种新型的DNAβ分子。建立了特异性检测PaLCuCNV、TYLCV和TYLCVNB的单一、双重PCR检测体系并对各体系的灵敏度进行了研究。进行单一PCR体系灵敏度实验表明可检测PaLCuCNV质粒和p质粒的最低浓度均为1 ng/mL。可检测TYLCV质粒的最低浓度为1 Lg/mL。双重PCR检测灵敏度与单一PCR一致。