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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的急性肠道传染病。对猪尤其是仔猪的危害极为严重,可导致仔猪腹泻,脱水甚至死亡。自2010年以来,以PEDV变异株引起的高发病率和高死亡率为特征的PED在世界范围内大面积流行,导致大量仔猪患病死亡,给养猪业造成巨大的经济损失。尽管近年来在阐明PED的分子流行病学,诊断,预防和治疗方面取得了进展,但其流行爆发仍在继续增加,给养猪业和国际贸易带来了严峻的问题。马齿苋(Portulaca oleracea L.,PO)为石竹目马齿苋科马齿苋属的一年生草本植物。广泛的分布于世界各地的热带和亚热带地区,属于药食两用中药,具有清热解毒、凉血止血、止泻止痢的功效。现代药理研究表明马齿苋具有消炎、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖血脂、增强免疫力等多种作用。为了探究马齿苋对猪流行性腹泻病毒的抑制作用以及作用机制,本研究首先制备了马齿苋提取物,评估了马齿苋提取物对VH细胞和Vero细胞的药物安全范围,然后用PEDV感染VH细胞和Vero细胞,建立体外病毒感染模型,用CCK-8和实时荧光定量PCR的方法检测马齿苋提取物对细胞的保护和对病毒的抑制效果,以及作用于病毒感染的时期,蛋白质印记分析和免疫荧光观察其对病毒蛋白复制的作用,并通过ELISA方法检测马齿苋提取物对PEDV VH细胞感染模型分泌细胞因子IFN-α、TNF-α、IL-6、IL-12和IL-22的影响,蛋白质印记法检测PEDV VH细胞感染模型细胞内NF-κB信号通路相关蛋白的表达,来探究马齿苋提取物抗猪流行性腹泻病毒的作用及作用机制。结果显示:马齿苋提取物在VH细胞和Vero细胞上的安全浓度分别为≤25mg/mL和≤12.5 mg/mL;马齿苋提取物可以抑制猪流行性腹泻病毒在VH细胞和Vero细胞上的复制,缓解病毒感染造成的细胞损伤;蛋白印迹分析经PO处理的细胞中S蛋白信号显著下调(P<0.01),免疫荧光信号减弱,表明马齿苋提取物以剂量依赖性方式下调了S蛋白的表达;25 mg/mL浓度的马齿苋提取物预处理可以减少VH细胞由PEDV感染刺激产生的细胞因子TNF-α、IL-22、IFN-α的过表达,对IL-6和IL-12的表达上调无显著影响(P>0.05);马齿苋提取物抑制了由PEHV感染引起在VH细胞中NF-κB、p-NF-κB蛋白的表达上调,IκBα蛋白的表达下调,同时MyD88的表达量被抑制,而TRIF的表达并无影响,说明马齿苋提取物通过MyD88依赖途径抑制了由PEHV感染引起在VH细胞中NF-κB通路的活化。结论:马齿苋提取物可以通过下调细胞因子(TNF-α、IL-22和IFN-α)的表达并抑制PEDV激活的NF-κB信号通路来抑制VH细胞中PEDV的复制。