【摘 要】
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目的:1.调查福建医科大学附属第一医院2017年～2020年临床分离的1598株肠杆菌科细菌中mcr-1基因的携带情况,进而研究mcr-1阳性菌株的流行特征及耐药谱,为临床预防和控制质粒介导的多黏菌素耐药基因mcr-1的传播与流行提供参考依据。2.以微量肉汤稀释法为金标准,评价4种不同药敏试验方法检测肠杆菌科细菌多黏菌素药物敏感性的性能,为实验室选择可常规开展的药敏试验方法及指导临床合理用药提供参
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目的:1.调查福建医科大学附属第一医院2017年～2020年临床分离的1598株肠杆菌科细菌中mcr-1基因的携带情况,进而研究mcr-1阳性菌株的流行特征及耐药谱,为临床预防和控制质粒介导的多黏菌素耐药基因mcr-1的传播与流行提供参考依据。2.以微量肉汤稀释法为金标准,评价4种不同药敏试验方法检测肠杆菌科细菌多黏菌素药物敏感性的性能,为实验室选择可常规开展的药敏试验方法及指导临床合理用药提供参考。方法:1.聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）法筛查2017年3月～2020年11月临床分离的非重复1598株肠杆菌科细菌中mcr-1基因阳性率。mcr-1阳性菌株分别以PCR法筛查碳青霉烯类耐药基因;微量肉汤稀释法检测多黏菌素、头孢他啶-阿维巴坦的最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）;Vitek-2药敏分析系统检测临床常用抗菌药物的敏感性;脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术进行同源性分析。2.收集本院临床标本分离的88株非重复肠杆菌科细菌,其中6株携带mcr-1基因,分别用黏菌素肉汤纸片洗脱法（colistin broth disk elution,CBDE）、Vitek-2TM药敏分析系统、BD PhoenixTM药敏分析系统、商品化微量肉汤稀释法、标准微量肉汤稀释法（broth microdilution,BMD）检测多黏菌素的MIC值。以BMD为参考,分析不同方法的基本一致性,分类一致性,极重大错误和重大错误;采用kappa一致性检验、配对χ2检验及Spearman秩相关法对4种药敏方法与金标准之间的一致性进行统计分析。结果:1.PCR结果发现本院1598株肠杆菌科细菌（包括735株大肠埃希菌,742株肺炎克雷伯菌,33株阴沟肠杆菌,24株产气肠杆菌,23株弗劳地枸橼酸杆菌及41株其他种属细菌）中仅4株大肠埃希菌携带mcr-1基因,携带率为0.25%（4/1598）;其中大肠埃希菌的mcr-1基因携带率为0.54%（4/735）。4株阳性菌株对多黏菌素B及黏菌素均耐药,MIC值在4～8μg/ml之间;对青霉素类,第三、四代头孢菌素类,单环类,喹诺酮类,磺胺类,四环素类抗生素耐药率较高,而对碳青霉烯类,氨基糖苷类和头孢哌酮/舒巴坦较为敏感,对替加环素均敏感。4株mcr-1阳性大肠埃希菌中仅1株携带NDM型碳青霉烯类耐药基因;该株细菌对头孢他啶-阿维巴坦耐药,余3株敏感。脉冲场凝胶电泳结果显示4株mcr-1阳性大肠埃希菌之间同源性较低。2.BMD结果发现88株肠杆菌科细菌中有7株（包括5株大肠埃希菌及2株肺炎克雷伯菌）对多黏菌素耐药,81株敏感;耐药菌株的MIC值在4～16μg/ml之间。与BMD相比,CBDE、Vitek-2TM药敏分析系统、BD PhoenixTM药敏分析系统、商品化微量肉汤稀释法的基本一致性分别为94.32%（83/88）、92.05%（81/88）、90.90%（80/88）和96.59%（85/88）,分类一致性均为100%（88/88）,未出现极重大错误和重大错误。4种药敏方法与金标准之间的一致性较好（kappa值均为1,p均<0.001,Mc Nemer检验p均为1,Spearman系数r均>0.5,p均<0.05）。结论:1.本院1598株肠杆菌科细菌中mcr-1基因携带率为0.25%,其中大肠埃希菌的mcr-1基因阳性率为0.54%,均处于较低水平。4株mcr-1阳性菌株不仅对多黏菌素耐药,而且同时对临床多种常见抗菌药物耐药,为多重耐药菌;经PCR筛查发现其中1株同时携带NDM型碳青霉烯类耐药基因。PFGE结果显示4株mcr-1阳性大肠埃希菌之间不存在同源性,不存在克隆传播,为散发流行。2.多黏菌素4种药敏方法在本实验室均达到了临床和实验室标准协会（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）及欧洲抗菌药物敏感性试验委员会（European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing,EUCAST）联合推荐的性能标准,其中商品化微量肉汤稀释法、CBDE检测性能表现最佳,目前可应用于本院临床微生物实验室日常工作中。
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