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本文分为两个部分:
第一部分:2009-2010年我国中东部人群乙型流感病毒的分子流行病学研究
本研究对2009-2010年在我国湖北和浙江省采集的341份发热患者的咽拭子样本,通过荧光定量PCR检测到54份阳性样本,阳性样本经过MDCK细胞分离鉴定后获得了18株乙型流感病毒(病毒分离率约为1.5%),并从中挑选出5株病毒(B/Hubei/4/2009、B/Hubei/7/2009、B/Zhejiang/41/2010、B/Zhejiang/49/2010、B/Zhejiang/429/2010)通过全基因组序列测定方法进行了分子特征及进化分析.结果显示:1)5株病毒均与2010年WHO所推荐的疫苗株(B/Brisbane/60/2008)亲缘关系较为密切,均含有Victoria谱系的HA基因和Yamagata谱系的NA基因,表明病毒发生了基因组重排;2)PA、NP与M基因的进化模式相似,PB1与PB2基因也有相似的进化模式,推测进化模式相似的基因功能之间可能有相关联性;3)分子特征分析显示5株病毒与B/Brisbane/60/2008有相似的分子特征,而在3株浙江分离株(B/Zhejiang/41/2010、B/Zhejiang/49/2010、B/Zhejiang/429/2010)HA1蛋白中197位点由Asn突变为Asp,这使得197位的糖基化位点发生了缺失.病毒HA1区糖基化位点的变化,可能会使毒株的抗原性发生改变;4)所有病毒的NA蛋白中116,149,152,198,222,250,291,402等位点的氨基酸均未发生突变,这说明病毒对神经氨酸酶抑制剂有敏感性.本课题的研究,有助于了解我国人群中乙型流感病毒的流行情况,为研究乙型流感病毒的流行特点及预防控制提供了科学依据.
第二部分:2010年鄱阳湖水禽流感病毒的分子流行病学研究
2010年1-3月,我们对鄱阳湖地区水禽开展了禽流感病毒的分子流行病学研究,在鄱阳湖区的9个半人工养殖场中采集了1036份水禽泄殖腔拭子样本,分别源于灰雁、绿头鸭和斑嘴鸭三个物种.通过荧光定量PCR检测到49份阳性样本,阳性样本经过鸡胚培养分离鉴定后获得了3株H3N2亚型(A/Mallard/Jiangxi/1-4/2010(H3N2)、A/Mallard/Jiangxi/1-19/2010(H3N2)、A/Mallard/Jiangxi/2.5/2010(H3N2))及1株H4N6亚型(A/Mallard/Jiangxi/1.15/2010(H4N6))禽流感病毒(病毒分离率约为0.4%).通过对4株病毒的基因组序列相似性比较、关键位点和进化分析,结果显示:1)分子特征分析显示4株病毒都具有低致病性禽流感病毒的分子特征;2)病毒基因组序列的进化分析结果显示4株病毒均属于亚欧分支,且4株病毒的M基因与高致病性H5N1禽流感病毒亲缘关系较为紧密;3)发现在同一养殖场中存在H3N2和H4N6两种不同亚型病毒共感染的现象,并分离到两种亚型病毒的重排子代病毒,充分证明了两种亚型病毒之间发生了基因组重排,即H4N6亚型禽流感病毒的PB1、PB2基因替代了H3N2亚型禽流感病毒基因组中的相应基因片段.4)动物感染实验证实,4株病毒对鸡有低致病性而对小鼠无致病性,这与病毒的分子特征分析结果相一致.本课题的研究有助于进一步了解鄱阳湖地区水禽流感病毒的流行情况,为研究禽流感病毒的基因重组及变异规律提供了科学依据.