目的:关于牙龈组织的研究目前大多仍局限于使用传统二维（2D）细胞模型以及简单动物模型,体外三维模型应用较少且不简便。本课题设想利用构建PDE模型的方法建立人牙龈组织体外模型并验证其有效性,证明模型有效后结合药物诱导技术对健康牙龈组织进行炎性诱导,使之成为炎症模型并验证其有效性。在此基础上,后续可通过牙龈组织体外炎症模型探究牙周炎发生时在牙龈组织中的各种信号通路及机制研究,并可为牙周炎症的药物开发研究提供基础。方法:1.利用健康牙龈组织建立牙龈组织体外培养模型。2.将已处理未经培养的健康牙龈组织与培养7天的牙龈组织做HE染色对比。3.以已处理未经培养的健康牙龈组织为对照组,不同培养基、不同炎性诱导物诱导浓度培养后的健康牙龈组织为实验组做部分牙周炎相关因子实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）检测相关因子m RNA表达水平。4.不同培养基、不同炎性诱导物诱导浓度培养后的牙龈组织做部分牙周炎相关因子q RT-PCR检测相关因子m RNA表达水平。5.以已处理未经培养的健康牙龈组织,较适培养基培养7天、较适培养基+炎性诱导物培养7天、已处理未经培养的牙周炎牙龈组织分组做部分牙周炎相关因子q RT-PCR检测相关因子m RNA表达水平。结果:1.成功建立牙龈组织体外培养模型。2.HE染色结果:细胞核形态及数量无明显改变,未观察到纤维出现明显退行性变化或断裂3.q RT-PCR检测结果:DMEM培养基培养7天的牙龈组织在6个检测指标的m RNA表达水平与对照组均无明显差异（ns,无统计学意义）,而α-MEM+TNF-α（0ng/ml）组HIF-1α、JNK、ERK1/2的m RNA水平与对照组差异明显（p<0.0001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）;DMEM培养基+TNF-α（100ng/ml）组中HIF-1α、NF-κB、p38、JNK及ERK1的m RNA表达水平与对照组有明显差异（p<0.0001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）;其余组无或仅有部分差异。4.q RT-PCR检测结果:DMEM+TNF-α（100ng/ml）组TNF-α、IL-2、IL-7的m RNA水平与DMEM+TNF-α（0ng/ml）组差异明显（p<0.001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）;DMEM+TNF-α（200ng/ml）TNF-α组的m RNA水平较DMEM+TNF-α（0ng/ml）组无明显差异;α-MEM+TNF-α（100ng/ml）与α-MEM+TNF-α（0ng/ml）相比,TNF-α、IL-7显著下降（p<0.01,有统计学意义）;α-MEM+TNF-α（200ng/ml）与α-MEM+TNF-α（0ng/ml）相比,TNF-α的m RNA表达水平变化无统计学意义。5.q RT-PCR检测结果:牙周炎组中HIF-1α、COX-2、NF-k B、ERK1/2、IL-1α/β、p38、JNK、VEGF-A的m RNA表达水平相较于健康牙龈组均显著上升（p<0.001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）;炎性诱导组中HIF-1α、COX-2、NF-κB、ERK1/2、IL-1α/β、p38、JNK、VEGF-A的m RNA表达水平相较于健康牙龈组均显著上升（p<0.001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）;炎性诱导组中HIF-1α、COX-2、NF-κB、ERK1/2、IL-1β相较于牙周炎组均无明显变化（ns,无统计学意义）,IL-1α、p38、JNK、VEGF-A则有明显上升（p<0.001,p<0.01,p<0.05,有统计学意义）。结论:牙龈组织的体外培养是可行的。成功建立了牙龈组织体外培养模型并对其炎性诱导。牙龈组织体外培养时的较适培养基为DMEM培养基,炎性诱导物为TNF-α时的较适浓度为100ng/ml。牙周炎性牙龈组织中也有与牙周膜细胞类似的机制通路,单纯以TNF-α为炎性诱导物时可能丧失部分与TNF-α关系不密切的细胞因子表达变化。为后续从牙龈组织方向探索牙周炎涉及牙龈组织的机制研究建立了一个简便高效快捷经济的研究模型,同时可为牙龈炎症方面的药物开发研究提供基础。