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目的:观察mi R-494在脂多糖(LPS)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达变化,并进一步探讨mi R-494对HK-2细胞凋亡的调控作用及其机制。方法:1、体外培养HK-2,给予1 ug/ml LPS分别干预0 h、1 h、3 h、6 h、12 h。采用Real-time PCR检测mi R-494的表达变化。2、构建mi R-494慢病毒过表达及阴性对照载体,转染HK-2细胞,荧光显微镜下估算转染效率。3、将HK-2分为四组:control组、LPS刺激组、mi R-494过表达+LPS组、mi R-494阴性转染+LPS组,除control组外,各组细胞予以相应处理后再均以1ug/ml LPS干预6 h。用Real-time PCR检测各组mi R-494、ATF3的表达水平。Annexin V-FITC/PI流式细胞法分别检测各组细胞的凋亡率。采用ELISA法检测各组细胞培养液中IL-6、TNF-α的浓度。结果:1、LPS刺激1 h后,HK-2细胞中mi R-494的表达水平即达到顶峰,为0 h组的3.19±0.21倍(P<0.05),3 h、6 h和12 h的表达量逐渐下降,与0 h组的mi R-494表达量均有统计学意义。2、LV-mi R-494慢病毒表达载体转染72 h后荧光显微镜下观察Zs Green绿色荧光,细胞转染效率均达80%以上,q PCR检测LV-mi R-494+LPS组细胞mi R-494较control组的表达水平为8.57±0.50倍(P<0.05),差异有统计学意义,提示转染成功。3、与control相比,LV-mi R-494+LPS组、LV+LPS组及LPS组的mi R-494表达水平分别为(8.57±0.50 vs 2.47±0.04 vs 2.34±0.02);ATF3 m RNA表达水平为(2.12±0.37 vs 5.84±0.42 vs 5.45±0.53),差异均有统计学意义(P<0.05)4、流式细胞检测各组HK-2细胞凋亡水平:与control组比较,LPS组、LV-mi R-494+LPS组及LV+LPS组的细胞凋亡率明显高于control组(P<0.05),LV+LPS组与LPS组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。5、ELISA法检测各组细胞IL-6、TNF-α的浓度:在LPS刺激下LV-mi R-494+LPS组、LV+LPS组、LPS组IL-6、TNF-α蛋白水平较control组均显著提高,且LV-mi R-494+LPS组与其它两组相比,IL-6、TNF-α蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),表明mi R-494的过表达对LPS诱导HK-2细胞释放IL-6、TNF-α有促进作用。结论:1、LPS可诱导HK-2细胞凋亡。2、重组慢病毒转染HK-2后,mi R-494表达明显上调,其靶基因ATF3表达下调。3、过表达mi R-494可显著促进炎性因子的释放,增强LPS的促凋亡作用,此作用机制可能是通过靶向抑制ATF3基因实现的。