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本研究以尚未建立转化事件特异性检测体系的转基因作物GT73油菜和59122玉米为研究对象,主要研究内容和结论有以下三个方面:
1.利用反向PCR(I-PCR)技术,热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术确定转基因作物的侧翼序列。结果表明,两种方法都成功地分离GT73油菜的侧翼序列,且两种方法各有优缺点;反向PCR成功地分离59122玉米左右两边界的侧翼序列。
2.根据侧翼序列设计特异性引物,以转基因作物种属特异性基因作为PCR扩增的内源参照,经过反复实验,建立转化事件特异性定性定量检测体系。结果表明,定性体系具有较好的特异性和灵敏度,GT73和59122的检测限分别为0.05%和0.1%;定量体系具有较好的重复性,用标准分子确定的两种转基因作物的检测限都可达到10个拷贝数。
3.利用重组PCR技术构建标准分子,以标准分子作为定量PCR外部标准品并建立标准曲线,检测含有转基因成分的混合样品,根据标准曲线计算转基因成分的含量。结果表明,重组PCR技术用于构建标准分子快速可行;以标准分子作为定量标准品的检测结果具有较好重复性和再现性,标准分子可以代替法定标准物进行定量检测。
这些研究内容和结论将会为今后转基因产品检测提供技术依据。