【摘 要】
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溴结构域（Bromodomain,BRD）家族蛋白是组蛋白赖氨酸乙酰化的识别因子,并且可以与其特异性结合。BPTF（Bromodomain PHD finger transcription factor）是BRD家族成员之一,可以识别乙酰化修饰的组蛋白赖氨酸位点,并且在染色质重塑、调节转录和胚胎发育等方面有着重要作用。BPTF基因上突变与错位以及表达上的失调对其功能的发挥有重要的影响,尤其在许多癌
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溴结构域（Bromodomain,BRD）家族蛋白是组蛋白赖氨酸乙酰化的识别因子,并且可以与其特异性结合。BPTF（Bromodomain PHD finger transcription factor）是BRD家族成员之一,可以识别乙酰化修饰的组蛋白赖氨酸位点,并且在染色质重塑、调节转录和胚胎发育等方面有着重要作用。BPTF基因上突变与错位以及表达上的失调对其功能的发挥有重要的影响,尤其在许多癌症的发生和发展起到了关键性的作用。在本文的第一部分工作中,我们首先对现有的BPTF-BRD抑制剂进行了分析调研,从中选择了活性较高的小分子抑制剂TP-238对其进行片段化处理,获得其潜在活性基团片段。进而,通过化学合成的方法对其进行结构改造,得到苗头化合物DC-BPi-03,其活性IC50值为698.3±21.0 n M。然后,通过苗头化合物与BPTF-BRD复合晶体结构的解析,进一步明确其结合模式并且提供了具体药物化学优化改造方向,从而得到了一种具有更高亲和力和选择性的BPTF-BRD抑制剂DC-BPi-07(IC50=16.0±5.0 n M)。随后,通过解析BPTF-BRD与DC-BPi-07复合物的共晶结构,验证了活性和选择性提高的原因,为后续在细胞水平探究其作用模式提供了化学探针。进一步的细胞水平研究表明,DC-BPi-07能够浓度依赖地抑制人髓性单核细胞白血病细胞MV-4-11的增殖,其抑制活性为5.2μM。最后,我们通过RT-q PCR实验,证明了DC-BPi-07对BPTF下游靶基因c-MYC、BCL2和CDK6表达的调控。为了发现全新骨架的BPTF-BRD抑制剂,在本文的第二部分工作中,我们针对实验室自建化合物库进行了抑制剂筛选,得到小分子抑制剂氯化血根碱。其分子水平抑制活性IC50值为344.2±21.5 n M。进一步,我们通过表面等离子共振实验确证了化合物和BPTF-BRD直接结合,其亲和力KD为287.3 n M。我们通过分子对接实验模拟氯化血根碱与BPTF-BRD的结合模式并对其分析。随后,我们测定了氯化血根碱对MV-4-11的增殖抑制作用,其活性为0.7μM,表明氯化血根碱具有一定的抗肿瘤作用。最后,我们通过蛋白质免疫印迹法初步验证了氯化血根碱通过对下游癌症基因c-MYC的表达调控实现对白血病细胞的增殖抑制作用。综上所述,基于我们的研究,DC-BPi-07具有作为化学探针研究BPTF如何参与c-MYC转录相关的癌症的潜力,也可作为开发临床候选药物的起点。而氯化血根碱能为溴结构域家族抑制剂的研究提供新的化学骨架。
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