甘草地上部分含有丰富的黄酮类物质,具有较好的的抗肿瘤、抗炎作用,研究甘草地上部分物质的药理活性对扩大药源,充分利用甘草资源具有重大意义。但是由于甘草地上部分中其它大量非活性物质的干扰,导致提取液中总黄酮的含量低,药效微,这严重制约了甘草地上黄酮类物质的进一步利用。因而,富集纯化黄酮类物质是开发利用甘草地上部分的基础。甘草地上部分中的化学物质种类多,成分复杂,不同化学成分的抗氧化活性具有很大差异,因此评价甘草地上部分物质的抗氧化活性对于资源的进一步利用就显得十分必要。基于此,本实验优选了一套黄酮类物质的大孔树脂富集工艺并利用柱色谱和溶剂萃取相结合的方法对甘草地上化学成分进行分段研究,评价了各部位成分的抗氧化活性,为甘草地上部分的进一步开发奠定基础。其研究结果如下:(1)筛选了适合甘草地上部分黄酮类物质的含量测定方法采用紫外-可见分光光度法建立了适用于甘草地上部分总黄酮含量测定的方法。分别以甘草苷、芦丁和槲皮素为对照品,结合直接测定法、A1C13显色法、10%KOH显色法和NaNO2-Al(N03)3-NaOH显色法,组合成7种测定方法。对比和考察7种方法的精密度、稳定性、线性及加样回收率,从中选出适合甘草地上部分总黄酮含量测定的方法。最终确定甘草地上部分总黄酮测定方法是以槲皮素为对照品,10%KOH为显色剂的测定方法。具体操作方法如下:精密量取样品溶液2 mL,置10 mL容量瓶中,加入1 mL10%KOH溶液,充分摇匀,静置5 min,去离子水定容至刻度,充分混匀后测定吸光度。(2)优选了一套甘草地上部分黄酮类物质的大孔树脂富集工艺以总黄酮回收率为指标,筛选大孔树脂型号并优化富集纯化参数,制定一套适用于甘草地上部分总黄酮的富集纯化工艺。实验通过静态和动态的吸附与解吸附两种方法筛选树脂型号;采用正交设计(L16(45))对上样液浓度、上样液pH、上样速度和洗脱乙醇浓度4个因素进行优选。结果表明HPD-BJQH大孔树脂最适合富集甘草地上部分总黄酮;最优工艺为:上样液黄酮浓度为2.15 mg.mL-1,上样量为9 BV,上样液pH为5,上样速度为3 BV/h,70%乙醇洗脱,洗脱速度为2 BV/h,洗脱体积为3 BV。纯化后总黄酮的纯度从原来的13.39%提升到44.92%。经验证,本工艺结果稳定,能较好的富集甘草地上部分中黄酮类物质。(3)把甘草地上部分化学物质按照化学成分特征分为五个部位建立了甘草地上部分上清液部位的HPLC-UV特征图谱,并利用此图谱对甘草地上物质进行分段研究。以化学成分的差异为指标进行分段研究。上清液部位采用大孔树脂法分段,得到了 30%乙醇洗脱部位,50%乙醇洗脱部位和70%乙醇洗脱部位。沉淀部位部分采用溶剂萃取法得到乙酸乙酯部位和氯仿部位。所得五个部位的化学成分具有较大差异。(4)氯仿部位的抗氧化活性最好,可重点开发利用以抗坏血酸和芦丁为阳性对照,比较了上清液部位、沉淀部位、大孔树脂富集总黄酮以及分段所得五个部位的抗氧化活性。其中氯仿部位的抗氧化活性最好,上清液部位的抗氧化活性最差。30%乙醇部位、50%乙醇部位和70%乙醇部位的抗氧化活性呈依次递增趋势,乙酸乙酯部位的活性低于氯仿部位的活性,物质的抗氧化活性和极性呈现相反的趋势。在以后的开发利用中,可以针对氯仿部位重点开发。