目的:先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease,HSCR）是一种由于胚胎发育早期肠神经系统功能异常,进而导致的先天性消化道疾病。发病机制中,神经嵴细胞的迁移异常在HSCR的发病机制中起着重要的作用。先天性巨结肠症的临床表现有多重症状,包括长期便秘,间断呕吐,反复腹胀和生长发育迟缓等。未经治疗的疾病通常会影响患儿生长发育,甚至死亡,目前的治疗方法以手术为主,切除病变肠管,重建肠道完整性及功能,但仍有部分儿童在术后会出现污粪、便秘等并发症。近年来,随着医疗水平的提升和相关分子生物学研究的进展,HSCR的诊疗有很大进步,但仍有许多关于发病机制的问题有待解决。研究表明,微小RNA（microRNA,miRNA）在许多生理或病理过程中起重要作用,比如迁移、增殖、周期、凋亡、自噬等。结合课题组已有的miRNA芯片结果,我们发现miR-517a在HSCR中表达异常。MiR-517a被发现参与多重疾病的发生发展过程,包括癌症在内,影响细胞迁移,而关于其在胚胎发育中的作用研究尚不多见。通过生物信息学预测发现miR-517a潜在调控下游靶基因 PTEN（gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN）,PTEN作为抑癌基因之一,多数研究提示其参与癌症的发生,但关于其在胚胎发育中调控机制的相关报道不多,尤其是在胚胎期肠神经系统发育中的作用还未见报道。本实验旨在研究miR-517a对下游PTEN的调控机制,探讨该机制在先天性巨结肠发生中的可能作用。方法:利用36例HSCR狭窄段肠管及34例性别年龄匹配的正常对照结肠组织样本,提取 RNA,反转录为 cDNA 之后,通过 qRT-PCR（quantitative real-time PCR）测定病例组和对照组结肠组织中miR-517a的mRNA表达水平。在体外细胞实验中,采取SH-SY5Y细胞系,利用miRNA inhibitor干扰后,通过细胞迁移、增殖实验来检测miR-517a的异常表达对细胞功能的影响。以miR-517a为上游,综合生物信息学预测及蛋白表达谱芯片的结果,预测miR-517a下游相关的基因,采用qRT-PCR及Western blot检测其在人群组织中的表达水平,通过报告基因实验确定miR-517a和PTEN的结合关系。在SH-SY5Y细胞系中验证miR-517a对PTEN的调控关系,通过miR-517a inhibitor+siRNA-PTEN共转染扭转实验验证高表达PTEN对细胞的影响,通过细胞功能实验（迁移、增殖、周期、凋亡）探讨信号通路中miR-517a、PTEN对神经细胞功能的影响。最后,通过RNA-seq技术,分析miR-517a/PTEN通路在HSCR发生中的可能作用。结果:HSCR狭窄段结肠样本中,miR-517a表达水平显著低于对照组,而PTEN的表达水平高于对照组。在SH-SY5Y细胞系中,低表达的miR-517a可促进PTEN的表达,抑制细胞的迁移和增殖能力。而高表达的miR-517a可抑制PTEN的表达,促进细胞的迁移和增殖能力。通过RNA-seq的数据,我们发现,miR-517a可能参与生长发育、干细胞多能性、核酸结合转录因子活性的调控,提示其可能参与胚胎早期发育的调控。结论:低表达miR-517a可以促进PTEN的表达,从而影响神经细胞的迁移、增殖功能,即miR-517a-PTEN通路可能与先天性巨结肠的发生,且miR-517a可能与胚胎发育息息相关。