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第一部分沉默LMP2基因对OGD/R条件下大鼠脑微血管内皮细胞血脑屏障蛋白表达影响目的探讨沉默免疫蛋白酶体亚基LMP2（lowmolecularweight protein 2,LMP2,低分子量蛋白2;又称β1i基因）表达对氧气-葡萄糖剥夺/复氧条件下大鼠脑微血管内皮细胞血脑屏障蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1表达和细胞迁移影响。方法大鼠脑微血管内皮细胞（rats brain microvascular endothelial cells,RBMVECs）复苏培养和传代,建立稳定、可靠的氧气-葡萄糖剥夺/复氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R）模型,采用CCK8检测细胞活性,LMP2-si RNA及阴性对照si RNA转染RBMVECs,免疫荧光染色（Immunofluorescence stain,IF）和免疫蛋白印迹（western-blot,WB）测定血脑屏障（blood brain barrier,BBB）相关蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1表达,细胞划痕实验评估RBMVECs的迁移能力。结果（1）RBMVECs经复苏传代后细胞生长状态良好,VWF因子免疫荧光染色鉴定培养的RBMVECs的纯度>90%。（2）建立了稳定可靠的氧气-葡萄糖剥夺1h/复氧24h（OGD/R）体外细胞缺血模型。（3）IF显示OGD/R组LMP2蛋白表达较正常条件培养组（Normal组）升高,但ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达降低。WB结果显示,与Normal组比较,OGD/R组LMP2蛋白表达上调,但ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达降低（P<0.001）。（4）细胞划痕实验显示在正常条件下培养（Normal组）,RBMVECs在“划痕损伤”后48h明显呈现增殖迁移修复这个“伤痕”,但在OGD/R条件下这种迁移能力明显下降。（5）WB结果显示,与Normal组相比,OGD/R条件下RBMVECs的ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达明显降低,有统计学差异（P<0.001）。但沉默LMP2基因表达后,这些蛋白下调的趋势被逆转了。与Control-si RNA组比较,LMP2-si RNA组ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达明显升高（P<0.001）。（6）WB结果显示,与Normal组相比,OGD/R条件下RBMVECs的Bax、cleaved Caspase3蛋白表达上调,抗凋亡Bcl-2蛋白表达明显降低,有统计学差异（P<0.001）。与Control-si RNA组比较,转染LMP2-si RNA沉默LMP2基因表达可逆转Bcl-2蛋白下调趋势,减少Bax、cleaved Caspase3蛋白表达P<0.001)。（7）细胞划痕实验显示,与control-si RNA组（阴性对照组）比较,OGD/R条件下,沉默LMP2基因的RBMVECs增殖迁移能力明显增加。结论沉默LMP2基因表达能够上调OGD/R条件下RBMVECs血脑屏障蛋白的表达,抑制细胞凋亡和促进细胞迁移。第二部分沉默β-catenin基因对OGD/R条件下大鼠脑微血管内皮细胞血脑屏障蛋白表达影响目的探讨沉默β-catenin基因表达对OGD/R条件下RBMVECs内Claudin-1、Occludin、ZO-1表达和细胞迁移影响。方法RBMVECs复苏培养和传代,建立稳定、可靠的OGD/R模型,采用CCK8检测细胞活性,β-catenin-si RNA及阴性对照si RNA转染RBMVECs,免疫荧光染色和western-blot测定目的蛋白表达,细胞划痕实验评估RBMVECs的迁移能力。结果（1）IF显示在OGD/R条件下RBMVECs的β-catenin蛋白表达较正常条件培养组（Normal组）降低。Western-blot结果显示,与Normal组比较,OGD/R组β-catenin蛋白表达明显下调（P<0.001）。（2）WB结果显示,与在正常条件培养的细胞（Normal组）相比,OGD/R条件下RBMVECs的ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达都明显降低,转染β-catenin-si RNA沉默β-catenin基因表达加剧这些蛋白下调趋势,β-catenin-si RNA组ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达较Control-si RNA组都有明显降低,有统计学差异（P<0.001）。（3）WB结果显示,与正常条件培养组（Normal组）相比,OGD/R条件下RBMVECs的Wnt3a、β-catenin蛋白表达明显降低,但转染LMP2-si RNA沉默LMP2基因表达可逆转这些蛋白下调趋势,LMP2-si RNA组Wnt3a、β-catenin蛋白表达较Control-si RNA组明显升高,有统计学差异（P<0.001）。（4）WB结果显示,与Normal组相比,OGD/R条件下RBMVECs的ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白表达明显降低（P<0.001）;转染LMP2-si RNA沉默LMP2基因表达可逆转这些蛋白下调趋势,但这种效果被合并转染β-catenin-si RNA所抵消,有统计学差异（P<0.001）。（5）细胞划痕实验显示,与control-si RNA组（阴性对照组）和blank组（空白组）比较,转染β-catenin-si RNA的RBMVECs在OGD/R条件下细胞增殖迁移能力明显减弱。结论Wnt/β-catenin通路调控脑微血管内皮细胞BBB蛋白表达,沉默LMP2基因表达可能通过活化Wnt/β-catenin通路上调脑微血管内皮细胞BBB蛋白表达,促进细胞迁移。