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实验目的:本研究主要探讨体外survivin小分子干扰RNA(siRNA)对人肝癌细胞株MHCC-97H Survivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。体内研究Survivin siRNA对裸鼠肝癌种植瘤Survivin基因表达以及肿瘤生长的影响。 实验方法:体外实验通过设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA，用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC-97H，实验分为3组:Survivin siRNA转染组（Sur-siRNA组），无关siRNA转染组(NC组)和无转染组（正常对照组）。采用RT-PCR、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;分别以终浓度为12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于细胞后24 h，采用流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡。 体内实验通过肝癌细胞株构建荷瘤鼠动物模型，将脂质体包裹的SurvivinsiRNA经静脉注入裸鼠种植瘤体内，以无关siRNA为对照组，观察动物及瘤体的变化，RT-PCR检测瘤组织survivin mRNA水平，Western blot检测瘤组织survivin蛋白表达情况。 实验结果:体外实验结果显示:转染后48h，Sur-siRNA组、NC组、正常对照组Survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.16、0.85±0.28、0.93±0.40，组间比较差异有统计学意义（F=414，P＜0.01）。Sur-siRNA组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义（t=-20.56、-28.37，P均＜0.001）。siRNA转染48h后，Si-survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白的相对表达量分别为0.602±0.005、0.835±0.007、0.993±0.003，组间比较差异有统计学意义（F=238，P＜0.01）;Sur-siRNA组蛋白表达水平最低，与NC组、正常对照组差异均有统计学意义(t=-40.17、-66.03，P均＜0.001)。转染后72 h和96 h，Si-survivin组细胞抑制率[（19.5±3.6）％、(12.0±0.9)％]显著高于于NC组[（3.6±0.9）％、(-1.3±6.1)％]（t=36.18、42.53，P均＜0.05）。分别以终浓度为12.5、25.0、50.0 nmol/L的siRNA作用于细胞后24 h，12.5、25.0、50.0 nmol/LsiRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为（22.64±2.54）％、（35.37±3.28）％、（53.28±4.35）％、（8.77±1.25）％、（9.72±1.37）]比较，差异有统计学意义(F=35.93，P＜0.01)，而且不同siRNA干扰浓度间凋亡细胞率两两比较，差异有统计学意义(t=-29.73、-38.57，P均＜0.001)。 荷瘤鼠动物实验发现:Survivin-siRNA注射组(SU-Ⅳ组)在注射后10天肿瘤体积较对照组明显缩小，差异有统计学意义(P＜0.05)。SU-Ⅳ组survivin mRNA及蛋白表达水平低于对照组(P＜0.001)。 结论:脂质体包裹的Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC-97HSurvivin基因表达，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。Survivin siRNA纳米脂质体抑制裸鼠肝癌种植瘤的生长，下调瘤组织Survivin mRNA及蛋白表达。