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DNA插入突变是标记、分离植物病原真菌功能基因的有效途径之一。本实验通过电转化法将双元载体pATMT1导入农杆菌AGL-1中,成功地实现了农杆菌介导的稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)转化,转化效率达每10~6个分生孢子＞250个转化子,并得到了1500多个转化子。对部分转化子的继代培养和PCR检测,证明插入到稻瘟病菌基因组中的潮霉素抗性基因可稳定遗传。用大麦叶片离体接种的方法快速测定稻瘟病菌转化子的致病性,发现2个致病缺陷突变体:A1-192和A1-139,5个转化子的生长速度明显减慢,8个转化子的产孢量明显减少。A1-192菌株不能侵入感病大麦和水稻品种的叶片。A1-139突变体则不能侵入水稻叶片及擦伤的大麦或水稻叶片,初步说明A1-139突变体的穿透和扩展进程同时被阻断。进一步的表型分析,发现A1-139突变体的产孢量显著下降,仅为野生菌株的0.7%,在疏水表面不能形成附着胞。Southern杂交显示A1-192基因组中的T-DNA为单拷贝插入,而A1-139基因组中T-DNA插入是双拷贝的。上述结果表明,A1-192突变体表型的改变可能是由于T-DNA插入而使某一具有重要生物学功能的基因失活所致。A1-139表型改变可能与两个T-DNA插入位点或其中之一的位点有关。分别用嵌套式反向PCR和HiTAIL-PCR扩增得到A1-192和A1-139突变体的插入T-DNA侧翼基因组序列。通过克隆、测序和BLAST分析,A1-192菌株的T-DNA插入点位于编码一个MAPK基因-MPS1(MGG 04943.5)启动起始位点ATG上游456bp处。而A1-139突变体T-DNA双拷贝分别插在MGG 01057.5和MGG 10568.5基因的CDS中。