目的：血管内皮细胞(vascular endothelial cells，VEC)作为组织与血液间的第一道屏障，是最先感受缺氧的细胞之一。在缺血性心脏病的发生发展过程中，内皮细胞受损、功能障碍是其中的关键因素。芍药苷(paeoniflorin，Pae)是从赤芍中提取的生物活性成分，是一种蒎烷单萜苷，文献报道有抗心肌缺血的作用。为了深入探讨芍药苷保护心肌缺血损伤的作用机制，本研究在成功培养人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)的基础上，建立稳定可靠的体外细胞缺氧模型，模拟心肌缺血缺氧微环境，探讨HUVEC在缺氧条件下细胞中SOD活性和MDA含量的变化，细胞培养上清中LDH活性和NO含量的变化，内皮细胞中eNOS、粘附分子以及NF-κB表达的变化，同时观察Pae的干预作用，希冀揭示Pae抗心肌缺血的可能作用机制。方法：采用胶原酶灌注法原代提取HUVEC，根据镜下内皮细胞的形态学特征及免疫荧光法检测细胞内von willebrand factor(vWF)，确定分离的细胞为内皮细胞来源，细胞传至3～5代时进行实验。采用法国BioMérieux(?)sa公司缺氧装置系统，建立HUVEC缺氧模型。MTT法检测Pae对缺氧损伤的HUVEC活性的影响，利用试剂盒检测Pae对缺氧损伤的HUVEC细胞中SOD活性和MDA含量以及细胞培养上清中LDH活性，观察Pae对缺氧损伤的HUVEC细胞是否具有保护作用。分别利用硝酸还原酶法及免疫细胞化学法检测细胞培养上清中一氧化氮的含量及eNOS的活性，用细胞ELISA法分析Pae对缺氧损伤HUVEC表达粘附分子ICAM-1，VCAM-1的影响，免疫细胞化学法检测Pae对缺氧损伤HUVEC细胞中NF-κ3的影响，进而分析Pae保护缺氧损伤的HUVEC的机制。结果：1．培养的细胞倒置显微镜下观察表现为典型的铺路石样形态学特征，融合后呈现单层生长和接触抑制的特性；免疫荧光法检测到95％以上的细胞胞浆内有vWF的表达，表明所分离的细胞为内皮细胞来源。2．MTT结果表明Pae能抑制缺氧引起的HUVEC减少，且呈现一定的浓度依赖性。3．芍药苷可以使缺氧损伤的内皮细胞中SOD活性明显升高而MDA含量明显降低，使细胞培养液中LDH活性降低。4．缺氧可导致HUVEC产生的NO明显减少，降低eNOS的表达。Pae能使缺氧损伤的HUVEC产生的NO增加，并有剂量依赖性，Pae各剂量组均能增加eNOS的表达。5．缺氧能显著增加HUVEC表达ICAM-1，VCAM-1。Pae能抑制缺氧损伤的HUVECICAM-1及VCAM-1的表达升高。且呈现一定的浓度依赖性。6．缺氧可诱导HUVEC显著表达NF-κB，Pae各剂量组均能明显降低NF-κB的表达。结论：1．应用胶原酶灌注消化法分离HUVEC，并用免疫荧光法对所分离的细胞进行了鉴定，证实为内皮细胞，为后续的试验提供了细胞来源。2．建立了HUVEC缺氧模型，模拟体内心肌缺血、缺氧的微环境，为抗心肌缺血药物体外机理研究提供了稳定可靠的细胞模型。3．Pae可以通过升高缺氧损伤的内皮细胞中SOD活性、降低内皮细胞中MDA含量、降低细胞培养液中LDH活性从抗氧化这方面对抗缺氧诱导的细胞损伤。4．Pae可能通过增加缺氧损伤的HUVEC eNOS的活性，进而增加NO的产生，对缺氧损伤的内皮细胞起保护作用。5．Paen可能通过减少核转录因子κB的活性从而减少ICAM-1，VCAM-1的表达，从抗炎这方面对抗缺氧诱导的细胞损伤。