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目的： 1. 研究A549细胞中敲低CXCR4对EGFR表达的影响。 2.探讨A549细胞及其裸鼠移植瘤中EGF联合（单独） PI3K抑制剂LY294002对CXCR4的表达作用以及对移植瘤生长的影响。 方法： 1设计合成特异性敲低CXCR4的siRNA,将其转染A549细胞，通过qRT-PCR方法检测CXCR4的转染效率；Western-Blot检测CXCR4的蛋白表达。 2 选出转染效率最高的siRNA转染A549细胞，qRT-PCR方法检测EGFR的相对表达量；Western-Blot检测EGFR的蛋白表达情况。 3 将A549细胞分为空白组、2μg/mlCXCL12组、4μg/ml CXCL12组,作用24h后Western-Blot检测细胞EGFR的蛋白表达。 4 将 A549 细胞分为空白组、10ng/mlEGF 组、40ng/mlEGF 组、100ng/mlEGF组，作用24h后Western-Blot检测CXCR4的蛋白表达，找到促进CXCR4蛋白表达的最适浓度，作为后续实验浓度。 5 将A549细胞分为空白组、EGF组、EGF+LY294002（PI3K抑制剂）组、LY294002（PI3K抑制剂）组，作用24h后Western-Blot检测CXCR4的蛋白表达。 6 通过Transwell小室检测空白组、EGF组、EGF+LY294002（PI3K抑制剂）组、LY294002（PI3K抑制剂）组，作用24h后四组细胞的侵袭性。 7 建立裸鼠移植瘤模型，随机分为4组：空白组、EGF组、EGF+LY294002（PI3K抑制剂）组、LY294002（PI3K抑制剂）组，用药期间记录裸鼠饮食和精神状态变化，测量裸鼠体重和肿瘤大小，用药结束后处死全部裸鼠，剥离肿瘤，测量肿瘤大小、HE染色观察肿瘤组织形态学变化。 8 运用Western-Blot及免疫组织化学检测裸鼠用药后CXCR4的蛋白表达。 结果： 1.CXCL12/CXCR4对EGFR表达的影响 1.1 siRNA干扰CXCR4对EGFR表达的影响 1)成功构建敲低CXCR4的A549细胞，qRT-PCR结果显示：转染组CXCR4的相对表达量明显低于对照组。Western-Blot结果显示：转染组CXCR4的蛋白表达水平明显低于对照组。且siRNA2的相对表达量最低，敲低效率最高。 2) 将siRNA2，siRNAcontrol敲低CXCR4后，qRT-PCR结果显示：转染组EGFR的相对表达量明显低于对照组。Western-Blot结果显示：转染组EGFR的蛋白表达水平明显低于对照组。 1.2 CXCL12对EGFR表达的影响 不同浓度的CXCL12作用A549细胞，Western-Blot结果显示：EGFR蛋白表达对CXCL12存在剂量依存关系，即CXCL12浓度越高，EGFR表达越强。 2.体外观察EGFR通路对CXCR4表达的影响 2.1 EGF对CXCR4蛋白表达的影响 不同浓度的EGF作用A549细胞，Western-Blot结果显示：CXCR4蛋白表达对EGF存在剂量依存关系，即EGF浓度越高，CXCR4表达越强。 2.2 PI3K抑制剂LY294002和激动剂EGF对CXCR4表达的影响 空白组、EGF组、EGF+LY294002组、LY294002组中,Western-Blot结果显示：CXCR4的蛋白表达在EGF组最强，LY294002组最弱，EGF+LY294002组强于LY294002组。 2.3 Transwell小室检测4组细胞侵袭性 Transwell小室检测空白组、EGF组、EGF+LY294002组、LY294002组四组细胞的侵袭性：EGF组最强，LY294002组最弱，EGF+LY294002组强于LY294002组。 3.裸鼠荷瘤实验观察肿瘤生长情况及对CXCR4表达的影响 3.1 16只裸鼠均成瘤,用药期间饮食及精神状态无明显异常；用药前后体重无明显差异。用药期间肿瘤大小与空白组相比，有明显差异。 3.2 显微镜下观察HE染色切片：瘤组织为肺腺癌，癌细胞异型性明显，核大深染，核浆比增大，细胞形态多样，核染色质呈粗颗粒状。 3.3 Western-Blot结果显示：CXCR4的蛋白表达在LY294002组中最弱，EGF组最强，EGF+LY294002组强于LY294002组。 3.4 免疫组织化学结果显示：CXCR4的表达在LY294002组中最弱，EGF组最强，EGF+LY294002组强于LY294002组。 结论： 1. 实验选用的siRNA可明显敲低A549细胞中CXCR4的表达，并抑制EGFR的表达。 2. CXCL12通过CXCL12/CXCR4轴促进EGFR的表达，起到正反馈作用。 3. 在A549细胞及其裸鼠移植瘤中EGF通过其下游PI3K/AKT信号通路上调CXCR4的表达、增强肺腺癌细胞的侵袭性，并影响移植瘤的生长。