【摘 要】
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目的:建立并改良柱前衍生反相高效液相色谱法（RP-HPLC）,测定大鼠脑内海马组织中氨基酸类神经递质,研究PTZ致痫大鼠脑内海马组织中谷氨酸（GLU）及γ-氨基丁酸（GABA）的含量变化。方法:通过PTZ皮下注射SD大鼠进行癫痫动物造模,将大鼠随机分为正常对照组（皮下注射生理盐水）、癫痫组（皮下注射PTZ）,样品经甲醇及乙腈处理后,采用Red Classical AQ-C18色谱柱（250*4.6
【基金项目】
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项目名称:Parvalbumin介导的Glu-GABA代谢途径在癫痫发作终止中的作用及分子机制，项目合同编号:81760242，项目来源:国家自然基金项目，项目起止时间:2018年01月至2021年12月
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目的:建立并改良柱前衍生反相高效液相色谱法（RP-HPLC）,测定大鼠脑内海马组织中氨基酸类神经递质,研究PTZ致痫大鼠脑内海马组织中谷氨酸（GLU）及γ-氨基丁酸（GABA）的含量变化。方法:通过PTZ皮下注射SD大鼠进行癫痫动物造模,将大鼠随机分为正常对照组（皮下注射生理盐水）、癫痫组（皮下注射PTZ）,样品经甲醇及乙腈处理后,采用Red Classical AQ-C18色谱柱（250*4.6mm,5um）,以FMOC-Cl为柱前衍生剂,流动相A:50mmol/L乙酸钠溶液（PH4.8）410m L+去离子水85m L+四氢呋喃5m L;流动相B:乙腈500m L。流速:1.0m L/min,在柱温30-32℃下采用梯度洗脱程序进行洗脱,检测波长265nm。结果:GLU和GABA在30分钟内分离完全,在质量浓度为20-200ug/m L范围内有良好的线性关系,线性相关系数均大于0.9995;两种氨基酸加标回收率均大于100%,加标回收率的RSD均小于2%。结论:改良后的FMOC-CL柱前衍生反相高效液相色谱法稳定、简单、反应快速、灵敏度高、特异性及重复性好,能有效分离并检测大鼠脑内海马组织中GLU与GABA。目的:通过检测戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）致痫大鼠海马谷氨酸（glutamic amino acid,GLU）及γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric amino acid,GABA）在痫性发作后30 min内的含量变化,研究癫痫的终止机制。方法:通过PTZ皮下注射建立SD雄性大鼠急性痫性发作模型,当大鼠痫性发作达IVV级时,分别于发作时（立即）及发作后5、10、15、20、25、30 min处死大鼠,断头取海马,采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）检测海马组织GLU与GABA含量。生理盐水皮下注射作为正常对照组。结果:痫性发作达到IVV级时,0、5、10、15、20、25 min组海马组织Glu含量较正常对照组明显升高,差异具有统计学意义（P0.05）;海马组织中GABA含量在5 min时显著增高（P<0.05）,随后开始下降,10 min时下降至最低,在15 min时再次缓慢升高,持续至25 min时达到高峰（P<0.05）,之后开始下降结论:痫性发作后GLU与GABA含量存在随时间变化的规律,GLU与GABA之间达到动态平衡,是癫痫发作终止的原因之一,GLU与GABA含量变化在终止癫痫发作时发挥了重要作用。
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