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目的:金草消毒颗粒(JCG)是广西壮药经验方,前期研究证明其对急性肝损伤及肝癌等都有显著疗效。本研究的目的是探究金草消毒颗粒对强化学致癌物二乙基亚硝胺(DEN)导致的大鼠肝细胞癌(HCC)的预防作用及其机制研究。方法:将80只SD大鼠随机分组,分为5组,分别为:空白对照组、DEN 组、JCG-L、M、H(1700、3400、6800 mg/kg)组。采用灌胃 DEN 的方式建立大鼠肝细胞癌模型。连续给药6周,观察5组大鼠的生存状态。第6周最后一次给药结束,禁食但可以自由饮用纯净水。12-16 h后,用浓度为10%的水合氯醛作为麻醉剂,收集血液样本的方式为腹主动脉取血,随后采集肝脏样本。采用苏木素-伊红(HE)染色肝组织切片,观察肝细胞结构以及病理变化。利用全自动生化分析仪分析血清,以检测肝功能指标,分别为谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)。应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清中的甲胎蛋白(AFP)以及大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)水平。超氧化物歧化酶(SOD)活力通过WST-1方法测定。TBA法测定丙二醛(MDA)含量。蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测肝组织程序性死亡受体-1(PD-1)和程序性死亡配体-1(PD-L1)的表达;石蜡切片的免疫组化技术(IHC-P)检测PD-1、PD-L1和TGF-β1的表达。结果:与空白对照组比较,DEN组大鼠肝脏病理切片中部分细胞溶解形成空泡,异形性细胞增多,细胞核嗜碱性增加,核仁增大,可见病理性核分裂现象,ALT、AST、TBIL水平明显升高(P<0.01)。SOD活力明显降低(P<0.01),MDA含量增加明显(P<0.01)。PD-1、PD-L1、AFP、TGF-β1表达上调,且有统计学意义(P<0.01)。与DEN组对比,金草消毒颗粒三个剂量组的给药显著降低了 ALT、AST、TBIL水平(P<0.01);根据HE染色切片观察,金草消毒颗粒明显地改善了 DEN诱导的大鼠HCC的组织病理学状态;下调了 PD-1、PD-L1、AFP、TGF-β1的表达。其中,以JCG-H组作用最为显著。结论:实验研究表明,金草消毒颗粒有效改善DEN诱导的大鼠HCC,并且是通过阻断PD-1/PD-L1免疫逃逸通路降低氧化损伤发挥治疗作用。可能与改善肝脏功能、促进肝组织自愈、增强机体抗氧化能力有关。