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miRNA是一类不进行翻译的非编码RNA分子,长度约为19~24个碱基对(bp),主要与信使RNA(mRNA)的3′UTR结合。miRNA的主要功能是通过靶向mRNA进行降解或翻译抑制来调控基因表达。miRNA的种子序列与靶mRNA的3′UTR形成部分互补或完全互补,借此发挥其特有的基因抑制性作用。目前已经有越来越多的学者开始着手针对miRNA的研究。不同的miRNA可能在许多途径上表现出致癌或肿瘤抑制作用,这取决于他们的目标基因或作用的信号通路。miRNA不仅参与调控恶性肿瘤细胞的增殖,在肿瘤的侵袭转移中也发挥重要作用。因此,miRNA在非小细胞肺癌中的作用越来越受到关注。与不同类型癌症相关的miRNA包括致癌miRNA、抑癌miRNA和miRNA调控因子。既往研究表明miR-140-5p在多种肿瘤类型中发挥重要作用;然而,研究miR-140-5p表达与非小细胞肺癌患者的病情变化及预后的关系研究非常有限。因此,miR-140-5p在NSCLC中的具体作用还有待确定。目的:本实验通过检验miR-140-5p在肺癌与癌旁组织中的表达差异,观察其低表达是否与肺癌相关。并探讨miR-140-5p能否调控YES1原癌基因的表达,进而影响细胞的增殖和凋亡,为肺癌的靶向治疗积累数据,提供新的研究思路。方法:通过RT-qPCR检验miR-140-5p在肺癌与癌旁组织中的表达差异,探讨miR-140-5p低表达是否与肺癌发生相关。在RPMI-1640完全培养基中培养肺癌A549细胞株,将A549细胞分为转染组、阴性对照组及NC组,转染组、阴性对照组分别转染miR-140-5p mimics、control mimics。转染48h后收集细胞,使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。使用TargetScan等靶基因数据库预测miR-140-5p的基因靶点,确定YES1基因存在miR-140-5p的作用位点,将包含有靶位点的3′UTR序列进行基因合成,并设置阴性对照组,进行Western blot检测,检测YES1、Bcl-2、Bax和Caspase-3等细胞凋亡相关因子的表达水平,明确miR-140-5p是否可以通过作用于YES1基因而引起A549细胞凋亡。使用CCK-8试剂检测,明确miR-140-5p是否可以通过作用于YES1基因抑制A549细胞增殖。结果:通过荧光PCR技术对比肺癌与癌旁组织中miR-140-5p表达的差异,发现癌旁组织中miR-140-5p的表达水平远远高于肺癌组织(P<0.05)。使用流式细胞仪检测转染miR-140-5p mimics后的肺癌A549细胞的凋亡情况,证实miR-140-5p的过表达能够促进肺癌细胞的凋亡。TargetScan等靶基因数据库中预测YES1存在miR-140-5p的可能作用位点,将包含有靶位点的3′UTR序列进行基因合成,再通过荧光报告载体检测,证实YES1是miR-140-5p的靶基因。采用Western blot检测,研究转染miR-140-5p后的A549细胞中YES1、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达情况,结果证实,与NC组相比,A549细胞中miR-140-5p过表达显著降低了YES1和Bcl-2在蛋白水平上的表达,同时mimics组Bax和Caspase-3的表达明显升高,同时CCK-8实验结果也证实了转染miR-140-5p后的细胞增殖能力减弱。上述结果提示,miR-140-5p靶向作用于YES1基因在体外影响A549细胞的凋亡与增殖。结论:1、与癌旁组织相比,miR-140-5p在肺癌组织中表达明显降低。2、miR-140-5p可靶向作用于YES1基因。3、miR-140-5p通过调节YES1基因表达影响A549细胞的凋亡与增殖。