【摘 要】
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脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌感染后所释放的毒力因子,是引发家畜繁殖疾病的重要致病因素之一。多项研究报道LPS暴露会导致卵母细胞成熟及后期胚胎发育过程受损。大蒜素是从大蒜的鳞茎部位提取出的活性物质,具有多种药理活性,已被证明对卵母细胞成熟有益。然而大蒜素能否缓解LPS暴露所诱导的卵母细胞成熟损伤及其作用机制尚未阐明。本试验以猪卵母细胞为研究对象,采用体外培养、
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脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是革兰氏阴性菌感染后所释放的毒力因子,是引发家畜繁殖疾病的重要致病因素之一。多项研究报道LPS暴露会导致卵母细胞成熟及后期胚胎发育过程受损。大蒜素是从大蒜的鳞茎部位提取出的活性物质,具有多种药理活性,已被证明对卵母细胞成熟有益。然而大蒜素能否缓解LPS暴露所诱导的卵母细胞成熟损伤及其作用机制尚未阐明。本试验以猪卵母细胞为研究对象,采用体外培养、药物处理、孤雌激活、免疫荧光染色、激光共聚焦、实时定量荧光PCR等研究方法,初步探讨大蒜素对LPS暴露所导致的猪卵母细胞成熟质量下降的缓解作用和对后续孤雌胚胎发育的促进作用,为大蒜素缓解LPS暴露引发的生殖损伤提供一定的理论基础。本研究主要分为如下三个部分:(1)大蒜素对LPS暴露所致猪卵母细胞核成熟损伤的缓解作用为构建猪卵母细胞LPS损伤模型,我们在卵母细胞TCM-199体外培养基中添加不同浓度的LPS(0,5,15,25μg/m L),检查并统计各组卵母细胞的第一极体排出率。结果显示,与对照组相比,15μg/m L、25μg/m L LPS处理组极体排出率呈极显著降低。为保证试验效果,后续研究我们选择15μg/m L的LPS作为最适处理浓度。接着,在含15μg/m L LPS的猪卵母细胞TCM-199成熟液中添加不同浓度的大蒜素(0.1,1,10μM)。结果显示,与LPS组相比,添加0.1μM、1μM大蒜素能够显著提升其极体排出率,且1μM浓度的大蒜素效果最好。因此,为了更好地研究大蒜素的缓解作用,我们选择1μM进行后续试验探究。随后,我们进一步发现LPS处理破坏了纺锤体的正常组装,导致了染色体排列发生紊乱,损伤了微丝构建组装。对大蒜素及LPS共同作用下的卵母细胞进行检测,我们发现上述异常现象得到了显著缓解。以上研究结果证实了大蒜素可以缓解LPS诱导猪卵母细胞核成熟的损伤。(2)大蒜素对LPS暴露所致猪卵母细胞胞质成熟损伤的缓解作用本次试验研究结果显示,LPS处理的猪卵母细胞中皮质颗粒分布异常,ATP水平显著下降,细胞自噬水平受到抑制以及自噬相关基因相对表达显著下调,并且卵母细胞内活性氧水平显著提高,抗氧化基因相对表达显著下调,同时造成卵母细胞早期凋亡率显著增加。然而,我们对LPS处理的猪卵母细胞进行大蒜素补充后,上述导致的异常情况都得到了明显的改善。因此,本试验结果表明大蒜素可以缓解LPS暴露所导致的猪卵母细胞胞质成熟损伤。(3)大蒜素对LPS暴露所致猪卵母细胞孤雌胚胎发育能力降低的缓解作用本研究我们挑选对照组和处理组中成熟的卵母细胞进行脉冲式电激活生产孤雌胚胎进行培养。研究结果显示,LPS处理对孤雌胚胎卵裂率和囊胚细胞活性无显著影响,但囊胚率和囊胚内总细胞数显著降低,补充大蒜素后孤雌激活胚胎囊胚率和囊胚总细胞数明显得到提高。本次试验结果说明LPS暴露的猪卵母细胞经大蒜素处理后能够促进其后续孤雌胚胎发育能力。综上所述,本文的研究结果说明大蒜素能够有效缓解LPS暴露导致的猪卵母细胞成熟损伤,提高后期孤雌胚胎发育能力。本研究对利用植源性活性物质优化猪卵母细胞体外成熟系统具备重要的理论和实践价值。
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