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目的:非酒精性脂肪肝病是目前最常见的代谢性疾病之一,蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)通路是内质网应激激活的三大通路之一,本研究旨在探究PERK通路与自噬的关系及其在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发病机制中的作用。方法:通过油酸诱导HepG2和LO2细胞内脂滴沉积,形成NAFLD体外细胞模型进行实验。用不同浓度的雷帕霉素处理HepG2和LO2细胞模型,检测各组细胞自噬水平、脂质沉积和细胞凋亡情况。用不同浓度的雷帕霉素、自噬抑制剂氯喹和PERK抑制剂GSK2606414处理细胞模型,其分组如下:油酸组、低浓度雷帕霉素组、高浓度雷帕霉素组;空白对照组、油酸组、油酸+雷帕霉素组、油酸+雷帕霉素+氯喹组及油酸+雷帕霉素+GSK2606414组;检测各组细胞自噬水平、脂质沉积和细胞凋亡情况。用Beclin-1 si-RNA和PERK si-RNA干扰细胞模型自噬蛋白Beclin-1和PERK表达,分组为:油酸+阴性对照si-RNA、油酸+Beclin-1 si-RNA组和油酸+PERK si-RNA组;检测各组细胞自噬水平、脂质沉积和细胞凋亡情况。通过油红O(ORO)染色定性和甘油三酯(TG)含量检测试剂盒定量测定细胞脂质沉积情况;通过蛋白质印迹检测PERK,Beclin-1和LC3蛋白的表达水平;通过mRFP-GFP-LC3表达质粒瞬时转染显示细胞的自噬流水平;通过FITCAnnexin-V/PI双染色的流式细胞术分析检测各组的凋亡率。结果:(1)HepG2和LO2两种细胞模型中不同浓度雷帕霉素对细胞自噬水平、细胞内脂质沉积和细胞凋亡的影响:低浓度雷帕霉素和高浓度雷帕霉素均增加了细胞模型LC3Ⅱ/β-actin和Beclin-1/β-actin水平,且高浓度雷帕霉素细胞模型LC3Ⅱ/β-actin和Beclin-1/β-actin水平高于低浓度雷帕霉素细胞模型;低浓度雷帕霉素处理细胞可减少细胞模型的脂质沉积和细胞凋亡,高浓度雷帕霉素处理细胞可更显著地减少脂质沉积,但反而增加了细胞凋亡。(2)在HepG2和LO2两种细胞模型中的检测结果均表现为:油酸+雷帕霉素+氯喹组LC3Ⅱ/β-actin水平显著高于油酸+雷帕霉素组,Beclin-1/β-actin及自噬流水平低于油酸+雷帕霉素组;油酸+雷帕霉素+GSK2606414组Beclin-1/β-actin、LC3Ⅱ/β-actin及自噬流水平均低于油酸+雷帕霉素组,但PERK/β-actin水平增高;油酸+雷帕霉素+氯喹组及油酸+雷帕霉素+GSK2606414组细胞脂滴沉积均多余油酸+雷帕霉素组,细胞凋亡率均小于油酸+雷帕霉素组。(3)在HepG2和LO2两种细胞模型中的检测结果均表现为:相较于油酸+阴性对照si-RNA组,油酸+Beclin-1 si-RNA组Beclin-1/β-actin和LC3Ⅱ/β-actin水平降低、脂质沉积增加而细胞凋亡率降低,油酸+PERK si-RNA组PERK/β-actin、Beclin-1/β-actin和LC3Ⅱ/β-actin水平降低,同时脂质沉积增加而细胞凋亡率降低。结论:我们的研究发现自噬对NAFLD细胞模型中的脂质沉积和细胞凋亡有一定的改善作用,但过量的自噬反而增加了细胞的凋亡率;抑制PERK可以降低自噬水平,虽然会增加脂质沉积,但可以降低NAFLD细胞模型中的细胞凋亡率,因此该途径可能成为治疗NAFLD的新方法。