【摘 要】
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在我国,羊绒是一种重要的进出口商品,辽宁绒山羊更是以其优质的羊绒品质、高羊绒产量和稳定的遗传特性而闻名,它是我国独有的一种珍惜品种。虽然这个种群在20世纪80年代就已培育,但对其羊绒生长的分子机制和调控机理,人们还知之甚少,所以本论文对此进行研究与讨论。本研究首先选用不同浓度、不同时间的FGF5处理辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞,提取总RNA并对其进行高通量测序分析,进而挑选出差异表达的基因和所涉及的生
【基金项目】
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国家自然基金项目辽宁绒山羊LncRNA生物学功能和作用机制的研究,（项目编号:31772557）；
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在我国,羊绒是一种重要的进出口商品,辽宁绒山羊更是以其优质的羊绒品质、高羊绒产量和稳定的遗传特性而闻名,它是我国独有的一种珍惜品种。虽然这个种群在20世纪80年代就已培育,但对其羊绒生长的分子机制和调控机理,人们还知之甚少,所以本论文对此进行研究与讨论。本研究首先选用不同浓度、不同时间的FGF5处理辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞,提取总RNA并对其进行高通量测序分析,进而挑选出差异表达的基因和所涉及的生物过程,通过统计学分析和生物信息学分析得到的主要结果如下:（1）本研究设置了四种处理小组,三个实验组为:F4＿24H组、F4＿72H组、F6＿24H组和一个对照组:C组。运用RNA-seq技术对其进行分析,结果显示:F4＿24h vs C组,共得到164个差异表达的转录本,其中上调的转录本70个,下调的转录本94个;F4＿72h vs C组,得到189个差异表达的转录本,上调的转录本78个,下调的转录本111个;F6＿24h vs C组,得到123个差异表达的转录本,上调的转录本27个,下调的转录本96个。（2）应用GO富集分析显示,在F4＿24H vs C组中差异表达的基因主要富集在细胞组成中的细胞外基质中和分子功能中的金属内肽酶活性、金属肽酶活性。（3）应用KEGG数据库进行比对,结果显示在F4＿24H vs C组中,差异表达的基因显著富集到ECM、FAK和PI3K-Akt三条信号通路中,共有28个差异表达的基因,其中基因TGA6、OPN、ITGB8、THBS1、ITGA4、ITGA8、LAMA2和LAMA4同时存在于ECM、PI3K、FAK三条信号通路中。根据NCBI及GENE CARD网站上的基因信息查询结果得知,ITGA6、OPN、THBS1、LAMA2基因的表达以及作用的部位与毛囊的生长发育相关。（4）蛋白质网络互作分析结果显示:F4＿72H vs C处理组,FGF5影响辽宁绒山羊皮肤细胞效果最为显著。（5）通过实时荧光定量PCR验证OPN、ITGAV、ITGA4和ITGA9基因相对表达情况,结果显示OPN、ITGAV有显著变化并且与前期测序分析结果一致。（6）应用CCK-8技术进行实验,与对照组相比FGF5处理细胞1天（24h）时增殖最明显,后期增殖无显著性变化。（7）应用生物信息学技术对ITGAV与OPN基因进行分析:OPN为胞外蛋白,ITGAV为跨膜蛋白。
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