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目的:miRNA是一种在转录水平上与m RNA互补配对结合抑制靶基因或蛋白表达的小RNA,参与多重疾病包括肿瘤的发生发展,本研究旨在探索究miR-424在子宫内膜癌中发挥的作用和机制,为EC的治疗和miR424-target network提供新的研究思路。方法:将miR-424mimics和miR-424-ASO(反义寡核苷酸链)转染入EC的两种细胞系(HEC-1-A和Ishikawa)中构建miR-424过表达和敲降模型,转染体系为50n M,转染载体为Lipofectamine3000。实验分为4组:Control组,miR-424mimics组,miR-424-ASO组和ASO-NC组。1.transwell侵袭实验检测过表达和敲降miR-424后EC细胞侵袭能力的变化,划痕愈合实验检测EC细胞过表达和敲降miR-424后细胞划痕愈合率的影响,观察转移能力的变化情况。2.Western blot实验检测细胞总蛋白E-cadherin和Vimentin的表达量,免疫荧光实验实现E-cadherin蛋白相对强度定量和定位。3.为验证E2F6的3′UTR与miR-424之间存在互补配对结合,用双荧光素酶基因报告检测实验验证E2F6是miR-424的靶点:将mut E2F6 3′UTR和E2F6 3′UTR质粒与miR-424 mimics或ASO-miR-424或ASO-NC转入EC细胞系中,分组为:Control组,miR-424+E2F6 3′UTR组/mut E2F6 3′UTR组,ASO-424+E2F6 3′UTR组/mut E2F6 3′UTR组,ASO-NC+E2F6 3′UTR组/mut E2F6 3′UTR组,使用荧光检测试剂盒和Promega Dual-Luciferase system检测各组荧光素酶反应强度。4.RT-q PCR实验和Western Blot实验,RT-q PCR检测EC细胞中高表达与敲降miR-424后E2F6 m RNA表达量的变化,Western Blot实验检测检测EC细胞中高表达与敲降miR-424后E2F6蛋白表达量的变化。5.为进一步探索E2F6与miR-424之间的相互作用,在过表达miR-424的EC细胞中转染质粒pc DNA3.1-E2F6和空载体质粒pc DNA3.1实现E2F6的过表达。6.为了探索E2F6是否减弱miR-424在EC中发挥的效应,使用Transwell侵袭实验和划痕愈合实验检测EC细胞侵袭和转移能力的变化。结果:在体外实验中:Transwell侵袭实验实验显示:与对照组相比,过表达miR-424明显抑制EC细胞的迁移和侵袭(P<0.05),在EC细胞系中敲降miR-424的表达后,EC细胞的迁移和侵袭能力加强(P<0.05)。划痕愈合实验显示:实验组miR-424 mimics的划痕愈合率明显低于对照组(P<0.05),ASO-miR-424组的划痕愈合率明显高于对照组(P<0.05)。WB实验结果显示:miR-424 mimics组E-cadherin蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05),vimentin蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05),而ASO-miR-424组与之相反(P<0.05)。免疫荧光实验的结果显示:E-cadherin蛋白定位于EC细胞膜周围。双荧光素酶基因报告结果表明:miR-424 mimics+E2F6 3′UTR组的荧光素酶强度明显低于对照组(P<0.05),ASO-424+E2F6 3′UTR荧光素酶强度明显高于对照组(P<0.05)。miR-424+mut E2F6 3′UTR组与对照组的荧光素酶强度无明显差异。ASO-424+mut E2F6 3′UTR与对照组相比,荧光素酶强度无明显差异。表明:E2F6是miR-424的靶点。RT-q PCR实验表明实验组miR-424 mimics中E2F6的m RNA表达量明显低于对照组(P<0.05),ASO-424组E2F6的m RNA表达量明显高于对照组(P<0.05)。WB实验结果表明:miR-424 mimics中E2F6蛋白的表达量明显低于对照组(P<0.05),ASO-424组E2F6的蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。为反向验证E2F6对miR-424的影响,在转染miR-424 mimics的EC细胞中转入质粒pc DNA3.1-E2F6和空载体质粒pc DNA3.1,结果表明:实验组miR-424 mimics+pc DNA3.1-E2F6中EC细胞的侵袭能力与划痕愈合能力明显高于对照组(P<0.05),miR-424 mimics+pc DNA3.1组的细胞侵袭能力与划痕愈合能力明显低于对照组(P<0.05)。结论:本研究表明miR-424作为一种抑癌miRNA通过靶向调节E2F6抑制EC的迁移、侵袭和EMT过程。在子宫内膜癌中miR-424的靶基因E2F6削弱miR-424的抑癌效应。