肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种危害严重的肠道致病菌，O157∶H7属于胞外菌，主要利用Ⅲ型分泌系统(T3SS)将毒力蛋白直接注入宿主细胞内，通过影响宿主细胞的各项生理功能，如改变细胞代谢情况、调节免疫应答、影响细胞内信号通路等，从而达到侵染宿主的目的。目前，利用生物信息学的方法分析EHEC O157∶H7存在62个毒力蛋白，经实验验证的有39个，其中NleE，NleC，NleH等毒力蛋白的致病机制研究的比较透彻，它们分别通过在不同程度上影响宿主体内的NF-κB、MAPK、泛素、细胞凋亡等信号通路，从而产生致病性，然而对于EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB的研究还处于初始阶段，研究其致病机制对于探索O157∶H7的致病性具有深远意义。　　肠出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB存在两个家族成员:NleB1，NleB2（其中NleB1是经实验验证的毒力蛋白，NleB2未经实验验证），而且经实验证实都是可以转录和表达的。与EHEC亲缘关系相近的肠致病性大肠杆菌（enteropathogenic Escherichia coli; EPEC）和柠檬酸杆菌(Citrobacter rodentium)只含有一个NleB毒力蛋白，C.rodentium的毒力蛋白NleB具有N-乙酰葡糖胺转移酶活性，它可以对GAPDH进行0连接的N乙酰葡糖胺糖基化修饰，从而破坏了GAPDH与TRAF2的相互作用，进而抑制了TRAF2的多聚泛素化和NF-κB的活性。　　经基因序列比对，发现肠出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1与柠檬酸杆菌（Citrobacter rodentium）的NleB碱基序列相似度为89％，这为我们进一步探讨O157∶H7的毒力蛋白NleB1、NleB2对NF-κB信号通路的作用及作用机制奠定了基础。　　利用Real-time PCR方法对nleB1和nleB2转录水平评价分析，证明了nleB1和nleB2在天然菌株中都可以转录，且NleB2的表达量是NleB1的约0.0076倍，差异显著。　　为了进一步深入探讨EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB的功能和致病机制，我们利用λRed重组法构建了nleB1，nleB2基因敲除株。毒力评价分析得出:敲除株与野生株相比，在LB培养基中的生长速度无显著变化，在DMEM培养基中生长速度要快;基因敲除前后对HeLa粘附细胞数目无显著的影响;利用野生株和敲除株侵染HeLa细胞，用TNF-α刺激，ELISA检测IL-8的水平，发现敲除后IL-8的表达水平上调。　　通过构建pAcGFP-nleB1，pAcGFP-nleB2，检测nleB1，nleB2对NF-κB信号通路的影响，发现nleB1，nleB2均可以抑制TNF-a激活的NF-κB信号通路，但是对IL-1β激活的NF-κB信号通路无抑制作用。　　本研究构建了nleB1，nleB2基因敲除株，并对其进行了初步的毒力评价分析，通过双荧光检测系统证明了nleB1，nleB2对TNF-a激活的NF-κB信号通路有抑制作用，但是对IL-1β激活的NF-κB信号通路无抑制作用。以上实验为下一步研究NleB1、NleB2蛋白的功能，以及阐明肠出血性大肠杆菌O157∶H7的致病机制奠定了基础。