龙牙百合组织培养的优化研究

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通过采用回归的最优设计进行试验处理方案设计,对龙牙百合组织培养体系进行优化,并分析影响龙牙百合组织培养各环节因素,从而得到最佳培养条件。用顶芽、幼叶、茎段和鳞片为外植体,进行小鳞茎和芽的诱导、继代增殖、生根结鳞茎诱导以及组培苗假植移栽等方面试验,试验结果如下:1初代诱导培养采用饱和D—最优设计研究6-BA和NAA浓度配比对鳞片、茎段和叶片诱导的影响,应用SAS 8.2统计分析软件依据试验结果建立多项式回归方程,并对6-BA和NAA进行单效应分析和互作相应分析,再应用Qbasic寻优软件进行寻优,得到各外植体诱导的最佳培养基。诱导鳞片产生小鳞茎的最佳培养基为:MS+6-BA1.5 mg/L+NAA0.5 mg/L,诱导小鳞茎鳞片产生丛生芽的最佳培养基为:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.25mg/L,诱导茎段产生丛生芽的最佳培养基为:MS+6-BA2.40mg/L+NAA0.25 mg/L,诱导叶片产生丛生芽的最佳培养基为:MS+6-BA2.50 mg/L+NAA0.25 mg/L。用附加不同浓度的6-BA和NAA的MS为培养基对顶芽进行诱导,结果表明,较适宜的培养基为:MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.2mmg/L。2芽的继代增殖培养以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA和KT单因素以及6-BA和NAA配合使用对龙牙百合丛生芽进行继代增殖培养,发现6-BA单独使用效果最好,应用Qbasic对其结果进行运算建立回归方程,并寻优得6-BA最佳浓度为1.0 mg/L,增殖系数为5.02/30 d。3生根结鳞茎的诱导培养以1/2 MS为基本培养基,添加不同浓度白糖,结果发现,白糖的浓度与结鳞茎呈正相关,糖浓度为6%时,结鳞茎数最多;与生根呈负相关,糖浓度太高,苗的移栽成活率低。当糖浓度为6%时,改变1/2 MS培养基中KH2PO4含量,发现在KH2PO4用量为5.1g/L时,对试管苗生根结鳞茎有促进作用,结鳞茎的时间缩短,鳞茎直径比较大。以改良1/2MS为基本培养基,添加6%蔗糖,采用311—A最优混合设计对NAA、IBA和IAA浓度进行试验方案设计,根据试验结果,应用SAS 8.2统计软件建立多项式回归方程,应用Excel进行单效应和互作效应分析,再应用Qbasic寻优软件进行寻优,得到生根结鳞茎的最佳培养基为:1/2 MS+NAA0.33 mg/L+IBA0.27 mg/L+IAA0.30 mg/L+6%蔗糖。
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