心肌肌钙蛋白I（cTnI）是临床上诊断急性心肌梗死的“金标准”,由于其在人体体液当中的浓度极低,故临床诊断中对其检测灵敏度要求较高。化学发光免疫分析技术因具有灵敏度高、反应快速、自动化程度高等优点,在心肌标志物检测方面应用广泛。研究者构造了以吖啶磺酰胺为化学发光剂,基于磁微粒表面“抗体A-抗原-抗体B”双抗夹心结构的化学发光免疫反应体系,并通过优化各种反应条件、调控抗原抗体的配比、构建p H调控的抗体取向策略、引入链霉亲和素-生物素放大系统、探究PEG的封闭效果等研究,提高了体系的检测灵敏度,改善了空白值和重复性。主要工作如下:1)基于cTnI检测的磁微粒化学发光法的构建与优化。首先制备了偶联抗体A的磁微粒（简称磁抗）和标记吖啶磺酰胺的抗体B（简称吖抗）。利用吖啶磺酰胺作为化学发光剂,几种反应物层层结合,构建“磁抗-抗原-吖抗”双抗夹心化学发光免疫反应体系。并通过各种优化措施,如优化磁抗制备方法,优化羧基活化条件,调整吖啶磺酰胺的投料量,改善磁抗、抗原、吖抗等反应物的配比,改进缓冲溶液的配方,以及对环境条件和人为操作进行改善等,最大限度地增加了抗体偶联量,显著提高了体系对于cTnI抗原的检测灵敏度。2)p H调控抗体在磁微粒表面的取向偶联及在cTnI化学发光检测中的灵敏度增强作用。常被用于蛋白质和纳米材料结合的化学偶联法几乎不加选择地占用抗体上的活性基团,容易导致抗体结合方向随机,抗原结合位点无法充分暴露而丧失活性。由于抗体的电荷分布和亲疏水性在不同p H下具有不同表现,通过调控抗体结合到磁微粒表面的最佳p H和抗体投料量,发展出一种简单高效的p H调控抗体取向偶联法,并将其应用于cTnI检测。从结果来看,p H调控后,抗体在磁微粒表面的结合效率、抗体取向以及对cTnI抗原的检测灵敏度都得到了显著提高。同时又在磁抗表面修饰PEG,改善了磁抗的亲水性和检测体系的重复性。结果表明,当1 mg磁微粒对应80μg抗体投料量,偶联p H从7.8降到5.8时,抗体结合量提高约60%,抗体Fc端暴露程度降低约75%,检测信号强度增加约8倍。体系的最低检出限为0.046 ng/m L,线性范围为0.05～100 ng/m L,重复性较好,达到了国家标准要求（手动操作的C.V%不超过15%）。3)链霉亲和素（SA）-生物素（SB）放大系统在cTnI磁微粒化学发光检测灵敏度提升中的作用研究。在前述工作基础上引入了SA-SB放大系统,以整体提高化学发光信号值。首先将吖啶磺酰胺标记到SA表面构造了吖啶磺酰胺-SA复合物（简称吖SA）,并计算了吖啶磺酰胺在SA表面的偶联量。然后将SB修饰到抗体B表面,制备了生物素化抗体（简称生抗）。之后,利用SA与SB之间强烈的生物结合作用,将吖SA偶联到生抗表面,显著增加了化学发光剂的偶联量。最后,利用抗原抗体之间的特异性识别与结合作用,构建了“磁抗-抗原-生抗-吖SA”复合物,并对不同浓度的cTnI抗原进行检测。最终得到该体系的最低检出限为0.037 ng/m L,线性范围为0.04～100 ng/m L,检测体系的重复性良好,符合国家标准规定（手动操作的C.V%不超过15%）。4)PEG封闭以降低磁抗表面非特异性吸附的研究。引入SA-SB放大系统,显著增加了吖啶磺酰胺的偶联量,化学发光信号得到整体提高,但相应的空白值也高,最低检出限具有较大优化空间。本章引入PEG对磁抗表面进行封闭,降低了化学发光剂在磁抗表面的非特异性吸附,从而降低空白值,改善体系的检测重复性。同时通过设计不同的PEG投料时刻和投料量,结合抗体在磁微粒表面的偶联原理,对PEG在磁抗表面的封闭原理进行了探究。最后对不同浓度的cTnI抗原进行检测,得到该体系的最低检出限为0.021 ng/m L,线性范围为0.03～100 ng/m L,重复性良好,符合国家标准规定（手动操作的C.V%不超过15%）。