【摘 要】
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鲫（Carassius auratus）是我国淡水养殖产量第五大的养殖品种,而鲤疱疹病毒Ⅱ（Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2）感染鲫会造成巨大经济损失。前期研究显示CyHV-2可侵染鲫肠道,损伤肠黏膜。为深入探究CyHV-2致肠道损伤的机制,本研究通过组织病理学、原位杂交和肠道转录组分析等揭示CyHV-2感染引发的肠道病理变化和分子机理,通过构建肠损伤模型阐明肠道损伤对C
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鲫（Carassius auratus）是我国淡水养殖产量第五大的养殖品种,而鲤疱疹病毒Ⅱ（Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2）感染鲫会造成巨大经济损失。前期研究显示CyHV-2可侵染鲫肠道,损伤肠黏膜。为深入探究CyHV-2致肠道损伤的机制,本研究通过组织病理学、原位杂交和肠道转录组分析等揭示CyHV-2感染引发的肠道病理变化和分子机理,通过构建肠损伤模型阐明肠道损伤对CyHV-2感染的影响,为探究病毒感染后肠道细菌移位机制提供了科学依据,也为鱼类肠炎病理机制研究和肠内营养技术开发提供了良好工具。主要结果如下:1、以CyHV-2对鲫分别进行腹腔注射和浸泡感染,结果显示CyHV-2感染可侵染肠道前、中、后各肠段。对病鱼肠道进行HE染色和原位杂交,HE染色观察到病毒感染导致鲫肠道黏膜层厚度降低、肠道皱襞破坏和肠绒毛消解。原位杂交显示CyHV-2主要富集在鲫肠道的黏膜下层,其中的淋巴细胞和嗜中性粒细胞可能为CyHV-2的敏感细胞。2、通过对CyHV-2感染的肠道组织进行转录组测序分析,共筛选出6239个差异基因,其中3345个基因表达显著上调,2894个基因表达显著下调。KEGG富集分析结果显示细胞凋亡途径显著上调。差异表达基因分析中,细胞凋亡相关基因TRAIL、TRAIL-R、Fas、caspase 8和caspase 7均显著上调;坏死性凋亡主要基因RIPK3也显著上调;紧密连接蛋白主要基因Occludin显著下调。提示CyHV-2引起的细胞凋亡可能是导致鲫肠道损伤的主要原因,RIPK3依赖性坏死性凋亡和紧密连接Occludin可能同样参与其中。3、使用5%浓度的葡聚糖硫酸钠（dextran sodium sulfate,DSS）对鲫进行口灌和肠灌,构建肠损伤模型。经组织病理学观察、炎性相关细胞因子的表达验证和肠道MPO活性验证等证实鲫肠道损伤模型成功建立。继而以CyHV-2对鲫肠道损伤模型进行浸泡感染,结果显示DSS处理组相比对照组的死亡进程更快,最终存活率更低。说明鲫肠道损伤会加剧CyHV-2的感染。
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