背景和目的 胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一。因其具有较强的局部侵袭和远距离转移的趋向而居于癌症致死原因之前列。因此,揭示胃癌播散的分子机制具有重要的理论价值和临床意义。侵袭和转移是一个由多基因参与的复杂过程,但有关这些基因在胃癌中的异常表达及它们之间的相互关系仍有待深入探讨。研究发现,细胞黏附分子 E-cadherin 与 β-catenin 的异常改变与胃癌的发生发展密切相关。E-cadherin 的表达减少或丢失被认为是细胞失分化的一种危险因素,是癌症患者预后不佳的一种生物标记。近来的研究表明,Wnt 信号途径也参与了胃癌的发生发展。胃癌的基因表达谱分析显示,Wnt2 及Wnt5A 在原发性胃癌中的表达均明显上调。正常情况下,β-catenin 通过与 E-cadherin 形成复合物定位于细胞膜的胞浆面而介导细胞间的黏附;E-cadherin 的进行性表达丢失和 Wnt2 的表达上调能够使 β-catenin从胞膜易位于细胞核内;后者与 TCF/LEF(T-细胞因子/淋巴细胞增强因子)结合后促进一系列靶基因转录,其中包括某些转移相关因子如CD44、MMPs 等的转录。综上所述,β-catenin 根据其细胞内的分布不同而发挥不同的生物学功能。研究显示,β-catenin 的细胞内分布在很大程度上取决于 Wnt 和 E-cadherin 的表达状况。然而,以往有关胃癌中 β-catenin、E-cadherin 和 Wnt 的表达状况及其肿瘤生物学意义的研究多为单项研究,缺乏对这三者进行综合性分析的报道。因此,这些结2果有一定的片面性。据此,本课题在组织病理学观察的基础上,利用多种实验方法,在 RNA 和蛋白质水平对不同胃组织中 Wnt2 和E-cadherin 的表达及 β-catenin 易位的情况进行同步观察,并就它们之间的相互影响/作用以及与胃癌侵袭和转移的关系进行细致的研究。材料和方法 胃癌组织标本选自大连医科大学肿瘤研究所(省高校癌症基因组学重点实验室)建立的人癌组织库。胃癌细胞系 AGS、HGC-27 购于上海中国科学院细胞库;MGC803、BGC823 均从北京肿瘤研究所引进。胃癌组织按 Lauren 分型分为肠型和弥漫型两个亚型,并以癌旁相对正常粘膜和癌前病变(萎缩性胃炎和肠上皮化生)为对照。基于冰冻组织微阵列,结合组织特定区域的 RNA/蛋白定点捕获,应用免疫组织化学、RT-PCR 和 Western 蛋白印迹分析等方法,平行检测 E-cadherin、Wnt2 和 β-catenin 在不同类型胃组织及胃癌细胞系中的表达与分布情况。然后,用 Kruskal-Wallis 和 Mann-Whitney 检验方法对上述指标在不同胃组织及临床不同分期中的表达进行差异分析;用Spearman 相关分析检测这几个指标间的相关性。结果1. 胃癌组织膜型 E-cadherin 表达明显减少,不同组织类型的癌组织间存在明显差异(P<0.01)。与相对正常黏膜和癌前病变相比较,胃癌组织可见明显的 Wnt2 表达上调和 β-catenin 的胞浆/胞核积聚(p<0.05),但在肠型和弥漫型胃癌之间无明显差别。2. 在一例 E-cadherin 膜着色消失的癌前病变中,未观察到 Wnt2的表达,虽能看到 β-catenin 膜着色基本消失和胞浆染色较强但核染色不明显。3. 胃癌中膜型 E-cadherin 的减少与淋巴结转移密切相关(P<0.05),但 E-cadherin 的表达在 T1,2和 T3,4组之间未见差异;Wnt2 的上调表达、β-catenin 膜分布减少及 β-catenin 核易位与淋巴结转移及 T 分期密切相关(p<0.05)。4. 膜型 E-cadherin 的表达和 β-catenin 在膜周边的分布呈正相关(r= 0.698,P<0.01),而与 β-catenin 的胞浆积聚和核易位呈负相关(分别为 r = ?0.398 和 r = ?0.353,P<0.01)。Wnt2 的增加与膜型 E-cadherin