【摘 要】
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编码组蛋白赖氨酸去甲基化酶的基因KDM5D是位于于哺乳动物Y染色体上,它能够编码具有Jmj C结构域的组蛋白去甲基化酶。此外,KDM5D能够特异性作用于H3K4me2及H3K4me3的甲基残基。国内外研究发现KDM5D基因与胚胎发育,神经性疾病,肿瘤发生均有密切联系。KDM5D在人的肾癌,胃癌以及前列腺癌细胞中起到抑制作用。然而,KDM5D参与个体发育方面的研究较少,具体调控机理尚不清楚。本研究以
【基金项目】
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“国家自然科学基金”（项目编号:31771601和31371478）
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编码组蛋白赖氨酸去甲基化酶的基因KDM5D是位于于哺乳动物Y染色体上,它能够编码具有Jmj C结构域的组蛋白去甲基化酶。此外,KDM5D能够特异性作用于H3K4me2及H3K4me3的甲基残基。国内外研究发现KDM5D基因与胚胎发育,神经性疾病,肿瘤发生均有密切联系。KDM5D在人的肾癌,胃癌以及前列腺癌细胞中起到抑制作用。然而,KDM5D参与个体发育方面的研究较少,具体调控机理尚不清楚。本研究以编码组蛋白去甲基化酶的Kdm5d基因作为实验研究对象,通过RTPCR及荧光原位杂交实验分析Kdm5d在成鼠精巢、TM3及MLTC-1细胞中的表达发现,Kdm5d在成鼠精巢及小鼠睾丸间充质TM3中表达较高且被定位在细胞核中。因此,本课题选用小鼠睾丸间充质细胞TM3及MLTC-1为实验材料,对Kdm5d基因功能进行研究,为阐明其在小鼠生殖细胞方面的发育调控机制奠定良好的基础。通过构建敲除Kdm5d稳转细胞系,对Kdm5d基因在小鼠睾丸间充质细胞TM3和MLTC-1进行生物学行为特性的研究。对MTT增殖和细胞周期实验分析发现,敲除Kdm5d基因后,细胞出现G2时期阻滞现象,则细胞无法进入分裂期进行有丝分裂,影响细胞的增殖。此外,敲除Kdm5d基因促进小鼠睾丸间充质细胞的凋亡。随后将Kdm5d基因瞬时转染到MLTC-1细胞中,从而过表达Kdm5d基因。MTT增殖和Transwell实验以及平板克隆实验研究表明,MLTC-1细胞中Kdm5d基因的表达上调对细胞增殖,侵袭和迁移无显著影响。综合上述可得,本课题研究分析了Kdm5d基因在小鼠睾丸间充质细胞中的表达及定位情况,Kdm5d基因表达下调对小鼠睾丸间充质细胞的增殖起到抑制作用,并对细胞凋亡起到促进作用。由此可以推断Kdm5d基因对小鼠睾丸间充质细胞的发育产生一定的影响。
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