人孕中期胎儿结膜上皮干细胞定位特征的初步研究 目的 本文参考有关文献，应用免疫组化方法研究孕中期不同胎龄胎儿结膜上皮细胞中，k7，k14，k19，P63和PCNA的表达及分布情况，探讨人胎儿结膜上皮干细胞的定位特征。 材料和方法 1．材料选择 取正常引产六小时内的胎儿。17周两例，19周两例，20周两例，23周两例，合计8例16支眼。所有病例无遗传病史和孕期感染史，且取材经过胎儿家属及医院的许可。 2．组织标本制备 连眼睑取出完整眼球，除去皮肤及皮下软组织（睑缘保留）剪除后部巩膜，取出玻璃体及色素膜，沿眼球矢状面剪取眼球组织块（呈窄条状，包含睑缘、全部睑结膜、球结膜、穹隆部结膜和部分角膜组织）。40g／L多聚甲醛固定，常规石蜡包埋。将组织蜡块制成3-5μm的切片。 3．SP免疫组化染色 采用两步法，严格按照SP试剂盒（购自福建迈新公司）说明书程序操作，k7，k14，k19，P63和PCNA抗体（购自迈新公司）的工作浓度为1∶100。取相应切片按免疫组化SP法染色，切片脱蜡至水，新鲜配制30ml／LH₂O₂室温孵育10min以灭活内源性过氧化物酶：修复抗原，将切片放入柠檬酸缓冲液，微波炉加热10min。待其自然冷却后用正常兔血清室温封闭20min，除去多余血清，滴加一抗（1∶150），室温孵育70min，PBS洗3次。滴加过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温孵育15min，PBS洗3次。DAB显色4min，苏木素复染，切片脱水，透明，封闭，空白对照以PBS代替一抗。K7、K14、K19