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目 的葡萄糖。6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphatedehy DrogenaseG6PD)缺陷症是一种最常见的遗传性红细胞酶缺陷病。G6PD基因突变是G6PD缺陷症最主要的原因。而目前已有的一些基因突变的检测方法要么操作复杂、耗时长、费用昂贵,要么不能一次性区分杂合与纯合,使在临床的推广使用受到限制。而四引物扩增受阻突变体系聚合酶链反应(Tetra-primer Amplification Refractory Mutation System-Polymerase Chain Reaction, Tetra-primer ARMS-PCR)具有简便、迅速、准确度好、特异性高并且能够一次性区分等位基因是否纯合的优点。本研究诣在建立一种四引物扩增受阻突变体系PCR快速检测中国人G6PD缺陷症6种高频突变位点G1388A、G1376T、A95G、 C10041、 C1024T、G871A的方法。方法1.针对中国人群G6PD基因G1388A、G1376T、A95G, C1004T、 C1024T、G871A6个常见的突变位点分别构建相应的DNA阳性参考品。按照T-ARMS-PCR引物设计原则分别设计G6PD基因6种高频突变位点的优化引物。2.通过对退火温度及内外引物浓度比的优化建立针对G6PD基因以上6个突变位点的T-ARMS-PCR方法。3.收集G6PD缺陷症标本(已用ARMS-PCR方法确诊有G1 388A、G1376T、A95G突变)和疑似G6PD缺陷症标本。用成功建立的T=ARMS-PCR方法分别检测89例G1388A位点突变的G6PD缺陷症患者和50例正常对照样本中G6PD基因G1388A位点,67例G1376T位点突变的G6PD缺陷症患者和50例正常对照样本中G6PD基因G1376T位点,38例A95G位点突变的G6PD缺陷症患者和50例正常对照样本中G6PD基因A95G位点。以及检测245例G6PD疑似患者标本G6PD基因C1004T、C1024T、 G871A三个位点。并用DNA测序进行验证。结果1.成功构建了G1388A、G1376T、A95G、C1004T、C1024T、G871A位点的阳性参考品以及设计了T-ARMS-PCR优化引物。2.成功建立了检测G6PD基因G1388A、G1376T、A95G、C1004T、 C1024T、G871A6个位点的T-ARMS-PCR方法。3. T-ARMS-PCR方法检测89例G1388A位点突变的G6PD缺陷症患者,检测出80例杂合子突变,9例杂合子突变,与测序结果一致；67例G1376T位点突变的G6PD缺陷症患者,检测出56例纯合子突变,11例杂合子突变,与测序结果一致。38例A95G位点突变的G6PD缺陷症患者,检测出35例纯合子突变,3例杂合子突变,与测序结果一致。245例G6PD疑似患者中检测出13例G871A位点突变,其中6例为杂合子突变。16例C1024T突变,其中5例为杂合子突变。结论成功的建立了一种检测G6PD缺陷症相关的突变位点的方法,并且不需要特殊的仪器设备。这种方法只通过6管PCR反应就可以检测G6PD缺陷症6种常见的突变。在不久的将来,在基于对G6PD缺陷症筛查的流行病学研究的基础上,可以应用于大量临床样本的检测。