猪链球菌（Streptococcus suis, SS）是猪的重要病原菌,同时也是一种重要的人畜共患病病原。根据荚膜多糖抗原的不同,SS可分为33个血清型,其中猪链球菌2型（SS2）分布最广,毒力最强。此外,流行病学调查表明,猪链球菌9型（SS9）也是一个重要致病血清型,与断奶仔猪脑膜炎、败血症和肺炎的爆发相关。通过分析SS2脑膜炎株SC070731病原特性和研究SS9脑膜炎株5’核苷酸酶（NT）抑制宿主免疫系统及其对毒力影响,为进一步了解猪链球菌致病机制提供依据。1.SS2脑膜炎株SC070731的病原特性本课题组前期分离一株SS2脑膜炎株SC070731,并对其进行全基因组测序,发现该菌株存在96.7%（57/59）的毒力因子,且与其它SS2相比含有一特有105 K基因岛。通过斑马鱼模型毒力评价、生长曲线、溶血试验及青霉素药敏试验等进一步了解该菌株病原特性。结果显示：SC070731对斑马鱼LD5o是4.95×105CFU/尾,与SS2强毒株HA9801和ZY05719相近,但是显著强于SS2毒力株P1/7（P＜0.05）；其复制一代所需时间为48 min,与HA9801、ZY05719和P1/7相似；四株菌在5%绵羊血平板上均呈现相似的溶血活性,均可见清晰溶血圈；虽SC070731含有青霉素耐药基因,但药敏试验显示该菌对青霉素最小抑菌浓度是0.05 μg/mL,仍然对青霉素敏感。2.SS9脑膜炎株NT缺失株的构建及生物学特性分析比较蛋白组学前期工作表明,NT是可能的毒力因子。为深入研究NT对猪链球菌毒力作用,利用温度敏感型穿梭质粒pSET4s,构建NT缺失株△nt,并利用穿梭质粒pSET2构建互补株C-nt。经PCR及测序鉴定,成功构建缺失株及互补株。nt基因缺失后没有明显的生长缺陷。NT可降解AMP产生核苷,与野生株GZ0565和互补株C-nt相比,△nt5’核苷酸酶活性显著下降（P＜0.01）。成功克隆表达NT,并用家兔制备多抗,提取野生株、缺失株细胞壁蛋白,以兔抗NT蛋白为一抗,Western Blot显示野生株细胞壁在76 kDa处有一明显条带,证实NT位于细菌表面并具有良好免疫原性,为进一步研究NT功能奠定基础。3.SS9脑膜炎株NT分子致病机制通过斑马鱼毒力评价、猪全血存活、CD1小鼠脏器分布和小鼠白细胞体内转录组分析等试验,深入研究NT对猪链球菌毒力的作用。结果显示：野生株GZ0565、△nt和C-nt的对斑马鱼LD50分别为5.21×105CFU/尾、3.31×106CFU/尾和8.34×105CFU/尾；与猪全血作用3h后,野生株GZ0565的存活率为13.7%,△nt存活率3.6%,但是加入800μM腺苷后,△nt存活率上升至6.4%；△nt在CD1小鼠的血液、脑、肝、脾和肾中的细菌数量显著少于野生株（P＜0.01）；小鼠白细胞体内转录组试验显示,攻击△nt组小鼠白细胞有88个基因上调表达,其中大约26%基因与炎症、免疫反应及中性粒细胞活性相关,提示NT通过产生核苷抑制宿主免疫系统及中性粒细胞活性,为SS在血液中存活提供新的解说。