【摘 要】
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自1981年Evans和Kaufman成功地从小鼠的胚泡里分离出内细胞团,体外培养出具有多向分化能力的干细胞(Stem Cell)后,近年来神经干细胞(Neural Stem Cell,NSC)的分离、体外增殖
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自1981年Evans和Kaufman成功地从小鼠的胚泡里分离出内细胞团,体外培养出具有多向分化能力的干细胞(Stem Cell)后,近年来神经干细胞(Neural Stem Cell,NSC)的分离、体外增殖、诱导分化以及干细胞的移植实验逐步取得成功。NSCs具有很强的自我更新和多向分化潜能,能分化为神经元和神经胶质细胞,为中枢神经系统的损伤修复以及多种神经系统疾病的治疗带来了新的希望。 同时,基因工程技术的迅速发展使人们可以对神经干细胞进行不同的遗传学修饰,以满足不同的科研及临床治疗需要。逆转录病毒(Retrovirus,RV)介导的基因转移技术是上世纪80年代初建立起来的高效基因转移方法,它借助逆转录病毒DNA载体与外源基因重组后,经包装细胞系产生缺陷型重组逆转录病毒,该病毒可以成功地感染靶细胞,将外源基因整合于染色体基因组中,并得以在靶细胞中表达。 神经干细胞移植于活体动物模型后,可能发生死亡,或者能存活、分化,甚至与宿主神经组织进行整合。有效的检测外源输入性神经干细胞的转归,对于判断移植疗效极其重要。绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)由水母中克隆得到,增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)是其人工改造型,有其独特的优势,是目前细胞生物学示踪剂研究中的一种重要手段。 本实验分离培养胚胎大鼠神经干细胞,并以逆转录病毒介导EGFP基因标记神经干细胞,探索其可行性。采用改进的Feeney自由落体脑损伤装置对成年大鼠进行致伤打击,并以EGFP标记的神经干细胞做颅内移植实验的初步研究。
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