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背景树突状细胞(Dendritic cells, DCs)对辅助性T细胞17(T help cell17, Th17)／调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)平衡的调控是免疫学研究中目前最为活跃的研究领域之一。Treg和新近发现的Th17是机体存在的两种不同于Thl和Th2的CD4+T细胞新亚型。Th17细胞介导炎症反应,Treg细胞维持免疫耐受,机体处于正常状态下二者保持平衡。新近研究发现,在诸如类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)等自身免疫性疾病中存在Th17/Treg细胞失衡,进而诱导异常免疫应答。位于免疫调节上游的机体最强的抗原提呈细胞——树突状细胞(Dendritic cells, DCs)对于上述免疫平衡起到了关键的调控作用。改变病情抗风湿药(disease modifying anti-rheumatic drugs, DMARDs)的联合使用是治疗自身免疫性疾病的重要策略。甲氨蝶呤(Methotrexate, MTX)等DMARDs药物对树突状细胞调控Th17/Treg免疫平衡的影响国内外尚未见报道。通过10余年的临床与基础研究,我们已证实周期特异性药物MTX与周期非特异性药物环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)联合治疗类风湿关节炎具有协同效应。鉴于此,本课题从树突状细胞的角度进行协同机制的研究,探讨MTX联合CTX是否通过影响DC功能,最终重建Th17/Treg免疫平衡。目的1.研究单用MTX、单用CTX以及MTX联合CTX对DC成熟度的影响；2.研究各组DC成熟度与DC刺激T细胞增殖能力的相关性；3.初步探讨MTX联合CTX作用下,DC对Th17/Treg细胞平衡调控作用的影响。方法建立雄性C57小鼠的卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏模型,随机分为OVA模型对照组、MTX组(3.03mg.kg-1.w-1)、CTX组(80.88mg.kg-1.3w-1)及MTX联合CTX组(MTX3.03mg.kg-1.w-1, CTX80.88mg.kg-1.3w-1)。OVA免疫后2d开始给药,共9周,于0、3、6、9周4个时点进行实验。采集各组小鼠骨髓,诱导培养DC,流式细胞仪检测各组DC表面分子(CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达；各组DC与同种异体正常小鼠CD4+T细胞共培养,3H-TdR检测T细胞增殖；进一步分析MTX联合CTX作用下的DC与Th17/Treg细胞水平的相关性。结果1.给药前,检测空白对照组与OVA组DC表面分子(CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达,后者表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05)；2.随着给药时间的延长,DC表面分子(CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达在各给药组中均呈下降趋势(P<0.05)；3.MTX联合CTX治疗组表面分子的表达下降最明显。第9周,联合组与OVA组及单药组比较,表面分子表达差异具有统计学意义(P<0.05),单药组与OVA组比较差异具有统计学意义(P<0.05),单药组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)；4.第9周各组DC与同种异体CD4+T细胞共培养,检测T淋巴细胞增殖,结果显示：与单纯T细胞对照组比较,OVA组、MTX组及CTX组T细胞增殖升高,差异有统计学意义(P<0.05),联合组T细胞增殖无显著差异(t=0.767,P=0.461)；与OVA模型对照组比较,各给药组T细胞增殖均下降,差异有统计学意义(P<0.05)；各给药组间比较,联合组较MTX或CTX单药组增殖下降,差异有统计学意义(t=6.998,P=0.012；t=2.703,P=0.035),单药组间差异无统计学意义(P>0.05)；5.MTX联合CTX组在0、3、6、9周各表面分子(CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ)的表达与相对应的Th17/Treg细胞比值呈正相关(分别为：r=0.862,P<0.001；r=0.855,P<0.001；r=0.865,P<0.001;r=0.860,P<0.001)。结论1.DC成熟程度与DC刺激T细胞增殖的能力平行；2.DC成熟程度升高,Th17炎性反应活跃；相反,DC成熟程度降低,Treg免疫抑制增强。各用药组均可抑制DC成熟,进而Th17/Treg比值降低,MTX联合CTX对其影响最为显著；3.MTX联合CTX明显抑制DC功能,最终重建Th17/Treg免疫平衡。本研究揭示了树突状细胞调控Th17/Treg免疫平衡可能是MTX联合CTX治疗自身免疫性疾病的新的作用机制和治疗靶点。