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凝血酶是凝血过程中一种重要的丝氨酸蛋白酶,可以加速和巩固凝血过程,调控炎症和伤口愈合速度,其浓度和活性在许多发病机理如白血病,动脉血栓症等中占主导作用,对凝血酶的分析检测在医学上具有重要的意义。在众多生物传感检测方法中,电化学生物传感技术以其灵敏度高、分析速度快、操作便利、成本低廉、易于实时监测等特点,具有独特的优越性。本论文基于核酸适体的高亲和力、高特异性及纳米材料和酶的放大作用,完成了以下三项研究工作,主要内容如下：1.基于适体-纳米金-辣根过氧化物酶(Aptamer-AuNPs-HRP)复合物的信号放大,研制了一种超灵敏度、高特异性的电化学适体传感器用于凝血酶的检测。在此实验中,凝血酶适体Ⅰ固定在金包磁性纳米粒子(AuMNPs)上作为捕获探针；AuNPs和HRP双标记适体Ⅱ形成Aptamer-AuNPs-HRP复合物作为检测探针；当凝血酶与适体特异性结合时,就会形成AuMNPs-适体I／凝血酶／适体Ⅱ-AuNPs-HRP三明治结构。该传感器通过AuNPs的特性和HRP的催化作用来实现信号放大。其它的蛋白如人血清蛋白,溶菌酶,纤维原蛋白和IgG对于凝血酶的检测没有明显的干扰。在优化条件下,该传感器对于凝血酶的响应线性范围为0.1-60 pM,检测限低至30 fM (S/N=3)。这种电化学适体传感器操作简单,响应快(整个检测时间少于35 min),灵敏度高,特异性强,充分显示了其在蛋白质检测和疾病诊断中的应用前景。2.制备了壳聚糖(CS)-Au纳米复合物,以高效吸附固定适体及酶标HRP,制备了CS-Au-HRP/Apt生物纳米复合物,并基于该复合物构建了三明治型凝血酶电化学适体传感器。该法优势在于能在该生物纳米复合物表面高效固定HRP酶标,有效地提高了酶标的负载量。以对苯二酚为媒介体,实现了超敏电化学信号的输出,该适体传感器可检测低至5.5 fM的凝血酶。3.基于去铁蛋白纳米粒子、HRP的催化性能和磁性纳米粒子的高富集特性,构建了一种三明治型安培适体生物传感器用于高敏检测凝血酶。制备金包磁性纳米粒子修饰的适体I(Apt1-AuMNPs)、适体Ⅱ和HRP修饰的去铁蛋白纳米粒子(Apt2-HRP-Apo)及凝血酶的三明治型复合物,并将之磁性分离富集至丝网印刷碳电极表面进行电化学检测。该方法制备的传感器检测凝血酶的线性范围为0.8-100pM,检测限可以达到0.17pM (S/N=3)。该方法操作简单,灵敏度高,特异性强,在蛋白质的检测和疾病诊断应用中具有一定的潜力。