C-myc反义RNA逆转录病毒载体的构建及其对膀胱肿瘤细胞恶性表型的抑制作用

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膀胱肿瘤是威胁人类健康的恶性肿瘤之一,其发病率居泌尿系肿瘤的首位,复发率极高,尽管近年来在肿瘤学和临床治疗学方面取得了较大进展,但迄今临床上仍缺乏判断其恶性程度的实用指标,给临床治疗带来极大困难,使得现有的预防及治疗措施也带有较大的盲目性,其早期诊断与治疗,一直是临床肿瘤学研究的热点和难点。 基因治疗是九十年代医学生物学领域的重大进展之一,尤其是反义技术近几年来更受重视,被称为“针对癌基因的基因治疗”,并已率先进入临床试用阶段,其技术日趋成熟。同其它基因治疗技术相比,反义技术简便实用,尤其是在膀胱肿瘤的治疗方面,更有其不可比拟的优越性,具有广泛的应用前景。 在我科既往的膀胱肿瘤研究中,已初步探讨了多种癌基因和抑癌基因与膀胱肿瘤生物学行为的关系,证实了在膀胱肿瘤的发生、发展全过程中可出现多种癌基因不同程度的扩增和过量表达及抑癌基因的失活。其中C-myc基因的扩增和过量表达是肿瘤形成的基础之一,C-myc基因的编码产物是DNA结合蛋白,在细胞的增殖与分化过程中起着十分重要的作用。抑制C-myc基因的表达,可迅速诱导肿瘤细胞的分化和凋亡。C-myc反义RNA可序列特异性地与靶RNA分子结合,从而阻断C-myc基因的表达。其在基础研究与临床实践中的广泛应用,必将为进一步了解肿瘤发生、发展的机制,开展肿瘤基因治疗提供新的思路和手段。 我们应用基因工程技术构建了C-myc反义RNA逆转录病毒表达载体并研究了其抗肿瘤作用和应用价值。 从pGEM2载体中切下1.4kb的C-myc基因第三外显子片段,将其反向插入逆转录病毒载体pcDNA3,成功构建了人C-myc反义RNA的表达载体,并将其命名为pCMB。应用脂质体(Lipofectin)转染法把pCMB转入人源性膀胱肿瘤细胞T24中,同时设立空载体组及C-myc正向插入载体组作为对照。结果表明,转染C-myc反义RNA,使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低,细胞周期分析显示G0+G1期细胞比率明显增高,电镜下细胞超微结构表现出生长抑制特征。提示C-myc反义RNA能有效抑制膀胱肿瘤细胞的恶性增殖,诱导肿瘤细胞的分化。
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