【摘 要】
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目的:本研究采用脂多糖(LPS)刺激Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC)模拟脓毒症肺损伤模型。探讨miR-223,炎症小体-3(NLRP-3)与脓毒症肺损伤相关性。证实间充质干细胞可能通过转移miR-223,抑制NLRP-3的表达减轻脓毒症Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的炎症反应。方法:建立脓毒症肺泡上皮损伤模型,并分为:对照组、不同LPS浓度(5、10μg/ml)处理组;检测miR-223,NLRP-3水平
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目的:本研究采用脂多糖(LPS)刺激Ⅱ型肺泡上皮细胞(AEC)模拟脓毒症肺损伤模型。探讨miR-223,炎症小体-3(NLRP-3)与脓毒症肺损伤相关性。证实间充质干细胞可能通过转移miR-223,抑制NLRP-3的表达减轻脓毒症Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的炎症反应。方法:建立脓毒症肺泡上皮损伤模型,并分为:对照组、不同LPS浓度(5、10μg/ml)处理组;检测miR-223,NLRP-3水平以及炎症因子水平。并设立miR-223激动剂、抑制剂组以及空白组,通过5μg/ml LPS处理后检测上述因子变化。通过基因靶蛋白预测以及然后通过双向荧光素酶实验确定研究对象NLRP-3。进一步探究NLRP-3与AECⅡ损伤关系,实验分组:空白对照组、si NLRP-3、组si NC空白组,予LPS刺激后检测炎症因子的表达。将miR-223激动剂及抑制剂转染间充质干细胞,并将实验分为五组:对照组、AEC组、AEC+MSC组、AEC+MSCmiR-223激动剂以及抑制剂组。检测炎症因子的表达以及NLRP-3的表达。结果:(1)不同浓度的LPS处理后12h及24h后,各组miR-223,NLRP-3表达水平与空白组对比P<0.05差异具有统计学意义。转染miR-223激动剂组,NLRP-3表达水平及炎症因子水平较各组对比P<0.05,差异具有统计学意义。(2)经过靶基因预测及双向荧光素酶实验证明,miR-223可以靶向调控NLRP-3的表达。且干扰NLRP-3表达后较对照组及空载组炎症因子水平明显降低,P<0.05差异具有统计学意义。(3)将间充质干细胞与成模后的肺泡上皮细胞共培养,通过PCR检测miR-223与NLRP-3的表达,Wester Blot检测NLRP-3的表达。结果表明MSCs与AEC共培养组较AEC组miR-223、NLRP-3的表达具有明显差异P<0.05,具有统计学意义。结论(1)miRNA-223,NLRP-3与脓毒症相关性肺损伤的发生相关,并且miR-223可以通过靶向抑制NLRP-3的表达抑制炎症因子产生。(2)间充质干细胞可能通过转移miR-223,抑制NLRP-3的表达减轻脓毒症脓毒症Ⅱ型肺泡上皮的炎症损伤。
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