近年来,伴随着细菌耐药性问题的日趋严峻,对新型抗感染药物的需求十分迫切,因此寻找传统抗生素的替代品显得越来越重要。抗菌肽是一类由生物体产生的具有抗菌活性的小分子多肽的总称。自其发现以来,人们已经相继获得了上千种具有不同抗菌活性的抗菌肽及其类似物。它们作为一类新型的抗菌物质,广泛分布于从低等生物到高等动植物的各种生物体中,越来越多的研究表明抗菌肽在宿主天然性免疫中发挥着重要的作用。与传统抗生素相比,抗菌肽独特的抗菌机理使其有望发展成为一种新型的抗菌药物,其潜在的应用价值也已经受到人们的普遍关注。颗粒裂解肽（Granulysin）与NK-lysin分别是人源性和猪源性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）以及自然杀伤细胞（NK）内含有的阳离子型抗菌肽,都是脂结合蛋白SAPLIP （saposin-like protein）家族成员之一。两者序列结构相似度为67%,空间结构均由五个α-螺旋（H1-H5结构域）经loop连接而成,且都具有抗菌活性。G13结构域是Granulysin中由19个氨基酸残基组成的一个肽段,可抑制真菌和细菌的活性,但对脂质体和动物细胞没有毒性。NKLF-2结构域是NK-lysin中由22个氨基酸残基构成的肽段,对结核分枝杆菌有直接的细胞毒性,且不会引起溶血反应。本研究主要采用两种不同策略分别探讨G13与NKLF-2.结构域在大肠杆菌中的表达。一种是通过设计共表达策略来抑制目标阳离子抗菌肽对宿主菌的毒性作用,以实现抗菌结构域在大肠杆菌中的高效表达。该方法主要是通过将一段编码阴离子配体的DNA序列与阳离子抗菌肽基因分别设计插入到pACYCDuet-1载体的两个多克隆位点中。构建的共表达型重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导共表达。结果证明该方法可有效提高阳离子抗菌肽的表达产量。从而为抗菌肽的深入研究和开发经济有效的生产方法奠定基础。另外一种提高抗菌肽原核表达效率的策略是,在不改变目标抗菌肽氨基酸序列的前提下,根据需要对mRNA翻译起始区（TIR）核苷酸序列进行优化突变,以提高mRNA翻译效率。为了研究mRNA TIR二级结构与抗菌肽基因表达的关系,以预测目标抗菌肽在大肠杆菌中表达水平,本研究分析了不同抗菌结构域在同一原核表达载体pACYCDuet-1中表达水平的实验数据。通过计算机程序对mRNA二级结构的模拟分析,计算并比较出其二级结构生成自由能之间的差异,提出了预测抗菌肽在E.coli中表达水平的几点依据,参考这些依据可以对不同抗菌肽基因进行改造以获得高效表达。