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目的:研究经汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)作用胃癌细胞系HGC-27后一些差异表达的微小RNA(miRNAs)功能,探讨Tet的作用机制;进一步研究miR-500a-5p对胃癌细胞增殖、周期、凋亡、迁移与侵袭的影响;利用生物信息学方法预测靶基因,并结合高通量测序中RNA-seq结果,预测miR-500a-5p的候选靶基因,并通过RT-q PCR验证miR-500a-5p所调控的靶基因,研究结果旨在为汉防己甲素对胃癌作用机制提供一些参考依据。方法:通过高通量测序技术筛选Tet作用胃癌细胞后差异表达的miRNAs,经过文献检索,选择4个与肿瘤相关的miRNAs作为研究对象,先通过生物信息学方法预测其靶基因,并对靶基因进行了GO分析和KEGG信号通路分析。而后选择经Tet作用胃癌细胞后表达水平降低的miR-500a-5p为研究对象。利用MTT实验、流式细胞术与transwell小室实验,检测胃癌细胞中转染miR-500a-5p inhibitor(miR-500a-5p抑制剂)后,对其增殖、周期、凋亡、迁移与侵袭能力的影响。生物信息学并结合高通量测序中RNA-seq结果预测靶基因,RT-q PCR从m RNA水平验证miR-500a-5p调控的靶基因。结果:(1)选择了4个与肿瘤相关的miRNAs,miR-500a-5p与miR-122-5p经Tet处理后表达水平降低,miR-7641和miR-149-3p表达水平升高,对4个miRNAs的靶基因使用生物信息学软件进行预测,预测结果显示,miR-500a-5p、miR-122-5p、miR-7641和miR-149-3p的靶基因分别为1050个、773个、1105个和1758个,将这些靶基因进行基因功能注释和通路富集分析,结果显示4个miRNAs的靶基因与细胞增殖、细胞迁移、细胞周期、凋亡与血管形成等肿瘤相关的信号通路有关。(2)在胃癌细胞HGC-27与AGS中,转染miR-500a-5p inhibitor 48 h后,与inhibitor NC(Inhibitor negative control,阴性对照抑制剂)组相比,miR-500a-5p inhibitor组的细胞活性数量显著减少;转染miR-500a-5p inhibitor 48 h与72 h后,胃癌细胞的细胞周期均阻滞于S期,胃癌细胞的凋亡率显著增加;转染miR-500a-5p inhibitor后,胃癌细胞的穿膜数显著减少,细胞的迁移与侵袭能力减弱。(3)生物信息学软件预测miR-500a-5p有1050个靶基因,RNA-seq结果表明有139个上调的基因,取两者做交集分析,交集中有8个基因,分别是DNAJA1、ABCA1、CBWD6、VPS41、ANO5、ZNF326、PCDH10和RORα,可能是miR-500a-5p的靶基因,结合文献查阅,选择参与肿瘤发生发展的VPS41、ANO5、ZNF326、PCDH10和RORα5个基因做RT-q PCR验证。结果显示,转染miR-500a-5p inhibitor后,与inhibitor NC组相比,miR-500a-5p inhibitor组的VPS41和ANO5的m RNA的表达量显著上调;ZNF326的m RNA在HGC-27细胞中表达上调,在AGS细胞中表达显著下调;RORα的m RNA在两种细胞中表达量均下降;PCDH10的m RNA在两种胃癌细胞未见表达。结论:(1)生物信息学分析:miR-500a-5p、miR-122-5p、miR-7641和miR-149-3p的靶基因与细胞增殖、细胞迁移、细胞周期、凋亡与血管形成等肿瘤相关的信号通路有关。(2)抑制胃癌细胞中miR-500a-5p的表达,可抑制HGC-27与AGS细胞增殖、使细胞周期阻滞于S期、诱导胃癌细胞凋亡,并抑制胃癌细胞迁移与侵袭能力。(3)生物信息学结合RNA-seq结果预测靶基因,初步筛选出miR-500a-5p可能的下游靶基因为VPS41、ANO5、ZNF326、PCDH10和RORα,其中VPS41和ANO5经RT-q PCR验证与测序结果一致,miR-500a-5p调控胃癌细胞的功能可能与上调这两个基因有关。