猪链球菌病是由多种致病性链球菌感染引起的一种人兽共患猪病,有重要的公共卫生意义。同时也是当今危害养猪业最重要的细菌性疾病之一,严重制约我国乃至世界养猪业的发展。猪败血型链球菌C群弱毒菌株ST171是生产猪链球菌弱毒活疫苗的专用菌株;PCV2的唯一结构蛋白Cap,包含病毒的主要保护性抗原表位,刺激机体能获得保护性免疫反应,是疫苗和诊断试剂研究的靶蛋白。猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus 2,PCV2）感染可引起免疫抑制,与链球菌继发或混合感染会致使猪群发病率和死亡率都明显上升。免疫接种是预防猪圆环病毒病以及猪链球菌病的重要措施,疫苗的开发对该病的防控至关重要。本研究先通过构建has B基因缺失的基因缺失菌株ST171Δhas B,抑制ST171荚膜多糖分泌,使细菌表面抗原蛋白易于向机体免疫细胞呈递,促进免疫应答反应。同时也初步评价了ST171Δhas B致病性。研究发现has B基因缺失的突变菌株ST171Δhas B致病力一定程度降低,表明其作为弱毒疫苗株将更具安全性。随后将猪圆环病毒PCV2的ORF2的基因片段克隆并构建了表达Cap蛋白的ST171Δhas B的重组活载体疫苗菌株ST171Δhas B-Cap。通过荧光定量PCR分析并确定了基因重组突变菌株Cap基因的转录水平与其亲本菌株ST171Δhas B的Szp基因的转录水平基本保持一致。通过接种小鼠证明用基因重组突变菌株免疫小鼠能够诱导机体产生Cap蛋白的特异性抗体,且显著高于商品化PCV2灭活全病毒疫苗。此外,通过马链球菌兽疫亚种攻毒试验证实其对链球菌的感染有同样保护作用。研究通过同源重组技术,把PCV2的ORF2的Cap基因克隆并整合到ST171的Szp基因中,构建了能表达Cap蛋白的ST171重组活载体疫苗菌株ST171Δhas B-Cap,为PCV2活细菌载体疫苗和应用ST171作为活菌疫苗载体提供候选菌株。