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干细胞因子(stem cell factor. SCF)是一种多功能细胞因子,参与机体发育中多种细胞的增殖调控,是多种哺乳动物干细胞增殖分化的关键因子。它作用于早期造血干/祖细胞,在维持其存活、促进增殖、及调控其向各系造血分化中起重要作用。人SCF由外显子6蛋白酶解位点选择性剪接形成可溶型(sSCF)与膜结合型(mSCF)两种形式,二者在造血中的作用有所不同。sSCF参与干/祖细胞的动员,而nSCF则被认为是造血微环境’niche"的重要组成分子,参与造血干细胞与"niche"之间的相互作用,造血微环境缺乏nSCF导致造血干细胞重建造血障碍。我们以往的研究结果阐明了sSCF、mSCF可分别通过旁分泌方式和并置性作用机制促进表达c-kit细胞的增殖。不仅如此,在细胞紧密接触的条件下,mSCF的作用更为显著,提示nSCF可能在维持造血干细胞功能以及促进其体内、外扩增方面有独特的效果。本论文在此基础之上,用DNA重组技术成功构建了人可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV-PGK-GFP-sSCF、MSCV-PGK-GFP-mSCF,二者与空载体MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞,包装出含有目的基因的假病毒颗粒并成功感染了脐带源间充质干细胞(CM-MSCs),流式细胞术筛选后的阳性细胞分别命名为CM-MSCs-S(表达可溶性SCF), CM-MSCs-M(表达膜结合型SCF)和CM-MSCs-V(空载体),各自作为滋养层细胞与c-kit受体阳性的CD34阳性细胞共培养,MTT法分别检测已感染的细胞的增殖情况及共培养体系中CD34细胞的增殖情况。结果发现,48、72,96小时,CM-MSCs-S细胞自身增殖能力显著高于CM-MSCs-V, CM-MSCs-M细胞(P<0.01)；与造血干细胞共培养24、48和72小时,CM-MSCs-S, CM-MSCs-M孔中的CD34阳性细胞增殖能力均显著高于CM-MSCs-V (P＜0.01),且CM-MSCs-M孔高于CM-MSCs-S孔(P<0.05)。上述结果提示导入的两种形式人干细胞因子基因可以在细胞中稳定有效的表达,并发挥作用,感染的CM-MSCs细胞通过表达sSCF. mSCF促进CD34细胞的增殖。同时,我们建立了一种较传统体外扩增造血干细胞方法更为有效的共培养体系,为探索有效的扩增造血干细胞的方法奠定宝贵的实验基础。