滤泡性淋巴瘤的形态学、免疫表型和分子遗传学关系的研究

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目的:系统地研究滤泡性淋巴瘤的形态学、免疫表型和分子遗传学特征,并探讨其在滤泡性淋巴瘤的临床病理诊断和鉴别诊断中的意义。方法:选取55例滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma FL)、28例其他类型的小B细胞性淋巴瘤,16例弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse larger B-cell lymphoma DLBCL)及10例反应性滤泡增生(Reactive follicle hyperplasia RFH)的病例,取存档福尔马林固定、石蜡包埋的肿瘤组织制作成组织芯片,用免疫组化方法,检测CD20、BCL2、BCL6、CD10、CD21及Ki-67等抗原的表达;应用标准PCR技术及DNA直接测序的方法检测上述FL和反应性滤泡增生中t(14;18)的易位,以看家基因β-Actin作为内对照检测DNA质量,并用嵌套式PCR检测上述55例滤泡性淋巴瘤和28例小B细胞性淋巴瘤中免疫球蛋白重链基因IgH的克隆性重排;采用双色荧光原位杂交FISH技术(Fluorescence in situ hybridization FISH)检测其中20例淋巴结滤泡性淋巴瘤,4例滤泡反应性增生淋巴结中t(14;18)的易位,均为石蜡包埋组织;并与传统的标准PCR检测结果进行比较。结果:(1)在反应性滤泡增生中,CD10和BCL6的表达仅局限于滤泡生发中心内,生发中心B细胞不表达BCL2,Ki-67增殖指数较高(>70%),且集中分布在生发中心的暗区。而在FL中,滤泡内、外细胞均表达CD10(65.4%)和BCL6(70.3%),滤泡性淋巴瘤中肿瘤性生发中心B细胞表达BCL2(85.1%),Ki-67增殖指数一般在30-40%,缺乏极性分布。SLL、MCL和MZL均不表达CD10和BCL6,但81.8%的SLL、77%的MCL和75%的MZL肿瘤细胞表达BCL2,这些肿瘤的Ki-67增殖指数多在30-40%。DLBCL中,CD10(25%)和BCL6(31.2%)表达不一致,约18.7%的病例共表达CD10和BCL6,BCL2表达率为50%,Ki-67增殖指数高低不一。(2)55例样本中有50(90%)例检出β-actinDNA的表达,其中34例(68%)的FL有IgH基因的重排。44例有β-actinDNA表达的淋巴结内的FL中,t(14;18)易位检出15例(34.1%)。其中14个在MBR(Major breakpoint region),1个在mcr(Minor cluster region)。6例结外FL中均未检测到t(14;18)易位。MBR和mcr的产物均经测序证实。(3)在有t(14;18)易位的15例中,有13/15例(86.6%)的表达BCL-2,有13/15例(86.6%)表达CD10,12/15例(80%)表达BCL-6,而没有易位的35例中,有26/29(89.6%)表达BCL-2,19/29(65.5%)表达CD10,25/29(86.2%)表达BCL-6。BCL-2、BCL-6和CD10的表达与t(14;18)易位无关。(4)6例结外FL中,免疫组化BCL-2(5/6)阳性,CD10(3/6)阳性,BCL-6(4/6)阳性。随访5例,病人恢复良好。(5)采用双色荧光原位杂交技术检测20例结内石蜡包埋的FL中,有16(80%)例可检出t(14;18)易位。4例滤泡反应性增生淋巴结中均未检测到t(14;18)易位。与PCR相比较,FISH方法明显优于传统的标准PCR,两者在统计学上有显著性差异。结论:(1)滤泡性淋巴瘤与对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤及反应性滤泡增生在组织结构和组成细胞上各具形态学特征,可用于诊断和鉴别诊断(2)作为滤泡生发中心B细胞的敏感标记物,CD10和BCL6对于FL的诊断及其与反应性滤泡增生和其他中、小B细胞淋巴瘤鉴别诊断有帮助;BCL2和Ki-67对鉴别FL和RFH有帮助,但对FL和其他中、小细胞性B细胞淋巴瘤的鉴别没有帮助。(3)结外滤泡性淋巴瘤(extranodul follicular lymphoma EFL)在形态学和免疫表型上与结内的FL的免疫表型相似,但缺乏t(14;18)易位,与皮肤的EFL相似,预后较好。组织学上应避免与黏膜相关淋巴组织边缘区B细胞淋巴瘤相混淆,免疫组织化学标记BCL-6和CD10对鉴别诊断有帮助。(4)CD10的表达与t(14;18)易位无关,BCL-2蛋白的表达也与t(14;18)易位无对应关系。FL中免疫球蛋白IgH基因重排检出率比其他小B细胞淋巴瘤低。(5)PCR方法检测t(14;18)易位敏感性低,检测FL石蜡包埋组织中t(14;18)易位有助于FL的诊断。FISH比PCR的敏感性更好,操作简便,可以运用于检测石蜡包埋组织中的分子遗传学改变。
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