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猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。该病通过多种途径传播，建立一种快速高效的ELISA检测方法，对PRRSV检测、免疫学研究具有重要意义和应用价值。将浓缩纯化的PRRSV HH08株免疫BALB/c小鼠，每隔2周免疫一次，待血清抗体效价达到1:10000以上，加强免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。经间接ELISA筛选，有限稀释法克隆，获得了5株稳定分泌抗PRRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为A7、B4、B8、B12和G12，并对A7、B4、B8和B12四株杂交瘤株制备了腹水。辛酸-饱和硫酸铵法纯化A7和B8腹水，SDS-PAGE分析可见单一且清晰的分子量约55kDa重链和25kDa轻链，纯化效果好。ELISA检测显示，细胞上清和腹水抗体效价分别在1:256~1:2048和1:6400~1:51200，腹水抗体效价明显高于细胞上清。Western blot结果显示所有单克隆抗体均与PRRSV在蛋白分子量97.2~66.4kDa间出现特异性反应条带，IFA鉴定表明单抗能够识别到病毒而出现特异性荧光。Ig亚类鉴定A7、B8和B12属于IgG2b，B4和G12属于IgM。杂交瘤细胞染色体计数平均数量在84~100条，均多于SP2/0细胞的66条染色体。特异性试验证明这5株单抗仅与PRRSV发生特异性反应。以PRRSV免疫兔制备兔抗PRRSV多克隆抗体，并用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化IgG。以纯化的多克隆抗体作为包被抗体，单克隆抗体B8作为检测抗体，建立抗原捕捉ELISA方法。该方法的最佳反应条件为：兔抗PRRSV多抗包被浓度为40μg/mL，鼠抗PRRSV单抗B8工作浓度为1.25μg/mL，待检样品孵育时间90min，酶标二抗工作浓度为1:5000，实验确定OD490nm＞0.175为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数均小于10%，最低检出量为1735TCID50，可用于检测PRRSV经典株和变异株，与Mrac-145细胞及其他参考猪病病原无交叉反应。采用建立的抗原捕捉ELISA方法检测11份临床感染病料样品，与RT-PCR比较，两者具有很高的符合率。结果表明，建立的抗原捕捉ELISA方法具有较好的特异性和敏感性，可用于PRRSV的快速检测。