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采用抗肿瘤化学药物治疗,是肿瘤治疗最常规的方案,但肿瘤细胞的耐药现象成为肿瘤治疗的主要障碍,而血液系统肿瘤表现更为明显。顺铂(cisplatin, DDP)作为目前临床上使用的最重要的抗癌药物之一,具有较广的抗瘤谱,但肿瘤细胞对顺铂的固有或获得性耐药又降低了其疗效。很多研究已经指出肿瘤多药耐药过程中,起药物外排作用的ATP-结合盒(ATP-binding cassette, ABC)转运体超家族起着非常重要的作用。最近又有研究指出氯离子通道(Cloride channel, ClC,简称氯通道)作为生物体内一类非常重要的阴离子通道,通过一些途径如细胞容积调节、内体-溶酶体小泡酸化等参与调节细胞微环境的变化,从而调节肿瘤细胞的耐药过程。同时有研究表示,多药耐药蛋白P-gp可能是氯通道的调节剂,进而提示氯通道与肿瘤多药耐药之间的相关性。本研究以人红白血病细胞株K562及经过对K562细胞系长期的阿霉素诱导和克隆筛选建立的经典多药耐药细胞系K562/DOX为研究对象,通过MTT的方法检测细胞生存率,Western blotting及RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-3、Cyclin D1、ClC-3及其mRNA的表达,Annexin V-PI实验检测细胞凋亡率,罗丹明123检测细胞线粒体膜电势,吖啶橙荧光染色的方法检测细胞内体-溶酶体小泡酸化程度,探讨顺铂耐药及与氯通道之间的相关机制。MTT结果显示顺铂在不同程度上降低了两种细胞系的生存率,联合应用NPPB与顺铂后细胞生存率均明显增加;NPPB对于阿霉素、H2O2及VK3引起的细胞生存率的降低均无影响。RT-PCR结果显示,联合应用NPPB与顺铂,能够拮抗顺铂引起的两种细胞系的Cyclin D1、ClC-3表达降低,Bax/Bcl-2的比值以及Cyt-C、caspase-3的表达增加。流式细胞术结果显示,联合应用NPPB与顺铂后,能够拮抗顺铂引起的两种细胞系的线粒体膜电势下降,细胞凋亡率增加。吖啶橙荧光染色结果显示,与单独应用顺铂组相比,联合应用NPPB及顺铂后内体-溶酶体小泡酸化程度上升。NPPB对顺铂诱导的各指标变化的影响在两种细胞系间无差异。结论:氯离子通道阻断剂NPPB能够拮抗顺铂的细胞损伤作用,但对阿霉素、VK3以及H2O2的细胞损伤作用没有影响,提示NPPB在一定程度上能够拮抗部分抗癌药的促凋亡作用。选择对细胞增殖无影响的氯离子通道阻断剂NPPB与顺铂联合应用,能够拮抗顺铂对两种细胞系的细胞损伤作用,但在两种细胞系间NPPB拮抗顺铂的作用无差异,说明NPPB并非主要通过调节多药耐药相关蛋白活性促使抗肿瘤药物外运增强而影响细胞生存率。进一步研究表明,NPPB能够拮抗顺铂导致的两种细胞系凋亡相关因子、线粒体膜电势、ClC-3的表达及内体-溶酶体小泡酸化等变化,NPPB对顺铂的拮抗机制可能是作为非特异性氯通道阻断剂,能够阻断凋亡性容积回缩的激活,从而阻断了细胞凋亡事件的发生,保证了细胞微环境的稳定。