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发光杆菌(Photorhabdusluminescens)是一类兼性厌氧、革兰阴性、能产生生物荧光的昆虫病原菌,与异小杆线虫(Heterorhabditis)互惠共生定殖于线虫肠后端。Toxincomplexs(Tc)毒素是发光杆菌属产生的最主要的一类杀虫毒素蛋白,具有高效广谱的杀虫活性。发光杆菌单独培养时不会产生该类毒素或毒性较弱。由于Tc毒素基因簇的成簇性,协调性,复杂性,目前人们对发光杆菌TT01中Tc基因簇研究较少,其全序列异源表达方面的报道尚无先例。通过NCBI查询到已测序的发光杆菌TT01基因组中Tc基因簇包含6个分散的Tc基因TcaZCB(6804 bp)、TccAB3(7419bp)、TccAB1(10954bp)、Tcd(51406bp)、TccC4(2891 bp)、TccC7(2871 bp)。本研究中以发光杆菌TT01基因组为模板通过PCR技术扩增TccC4基因plu0976、TccC7基因pJu4488,进行T载体连接从而构建了pMD 18-Tcc4(6kb)、pMD 18-Tcc7(6kb)重组质粒。利用直接克隆技术从发光杆菌TT01基因组DNA中快速获得TcaZCB plu0514-0515、TccAB3plu0805-0806、TccAB1 plu4165-4169、Tcdpl-096071 4个Tc基因簇,构建相应的重组质粒p 15 A-cm-TcaZCB、p 15 A-cm-TccAB3、p 15 A-cm-TccAB 1、p15A-cm-Tcd。利用线环重组技术对p15A-cm-TcaZCB重组质粒进行亚克隆修饰,构建p 15A-OriT-TnpA-Genta-TcaZCB重组质粒。通过接合转移将p15A-OriT-TnpA-Genta-TcaZCB重组质粒导入到一种分布广、繁殖快、数量多、营养需要简单、竞争定殖力强的植物根际促生菌-荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens,Pf5)中,通过抗性筛选和菌落PCR鉴定成功获得了重组工程菌株Pf5::TcaZCB。对获得的荧光假单胞菌重组工程菌的培养条件和生长情况进行观察绘制生长曲线,结果显示导入TcaZCB基因对Pf5生长不产生影响。为发光杆菌Tc毒素复合体寻找适宜的异源表达宿主提供更充实的证据,为以后对不同Tc毒素进行遗传改造及杀虫机理研究打下一定的基础。