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目的:心脏损害是高血压常见的靶器官损伤,合并肥胖及代谢紊乱者尤为突出,核因子红细胞2(Nrf2)作为重要的转录因子,对心脏结构和功能的调控作用越来越受重视。清肝滋肾方源于我院国医大师周仲瑛教授瘀热理论,但清肝滋肾方对肥胖高血压的靶器官损害的干预作用及其机制是否尚不清楚。因此,我们本研究的目的是为了探究清肝滋肾方对肥胖高血压心脏损害的干预作用及潜在机制。研究方法:将20只SHR随机分为4组:标准饮食组(STD)、高脂饮食组(HFD)、清肝滋肾低剂量组(QL)、清肝滋肾高剂量组(QH)。标准饮食组的大鼠喂食标准饮食,高脂饮食组和清肝滋肾治疗组的大鼠,给予连续十六周的高脂饮食,清肝滋肾低剂量组和清肝滋肾高剂量组的大鼠给予口服清肝滋肾水溶性提取物1010mg/kg/天和4040 mg/kg/天进行干预,连续干预16周,做如下检测:(1)测量SHR的血压和体重,超声检测SHR心脏结构和功能;(2)SHR心脏组织的苏木精-伊红(HE)染色、麦胚凝集素(WGA)荧光染色,检测心脏结构和心肌细胞大小。使用蛋白免疫印迹(WB)和免疫组化(IHC)法来检测SHR心脏组织中利钠肽A(ANP)、利钠肽B(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的蛋白表达;(3)SHR心脏组织马松染色和天狼猩红染色来检测心脏组织纤维化的程度。WB和IHC法检测SHR心脏组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、Fibronectin 的蛋白表达;(4)用酶联免疫吸附测定(ELISA)、WB和IHC法检测血清与心脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)的含量;(5)使用透射电镜法检测心脏组织线粒体形态,提取心脏组织核蛋白、浆蛋白和线粒体蛋白,使用WB、IHC和免疫荧光(IF)来检测心脏组织中柠檬酸合成酶(CS)、核呼吸因子1(NRF-1)、血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、线粒体转录因子A(TFAM)等的蛋白表达;(6)使用二氢乙啶(DHE)染色检测心脏组织中超氧化阴离子的含量,使用WB、IHC法以及相关生化试剂盒检测心脏组织中3-硝基酪氨酸(3-NT)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OhdG)、NAD(P)H醌脱氢酶1(NQO1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚单位(GCLM)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、谷胱甘肽二硫还原酶(GSR)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、过氧化氢酶(CAT)等蛋白的表达量与活性,使用相关试剂盒及WB法检测蛋白羰基化程度,使用相关生化试剂盒检测丙二醛(MDA)的含量,使用相关试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量。(7)提取浆蛋白、核蛋白和线粒体蛋白使用WB和IF法检测心脏组织中Nrf2的蛋白表达量。研究结果:(1)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)可以显著降低高脂喂养SHR的体重、收缩压(SBP)、平均动脉压(MAP)、舒张期左心室内径(LVID;d)、收缩期左心室内径(LVID;s)、收缩期左室后壁厚度(LVPW;s)和左心室质量(LV Mass),并且一定程度降低舒张压(DBP)、舒张期室间隔厚度(IVS;d)、收缩期室间隔厚度(IVS;s)和舒张期左室后壁厚度(LVPW;d),并且可以显著增加高脂喂养的SHR的射血分数(EF%)、缩短分数(FS%)和二尖瓣口血流速度E峰与A峰比值(MVE/A)。(2)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)可以明显改善心脏组织形态,包括使心肌细胞排列较整齐,减轻心肌细胞肥大和肿胀程度,抑制胶原纤维沉积,缩小心肌细胞的表面积等,而潜在的机制与清肝滋肾方能显著抑制心脏组织中ANP、BNP和MYH7的表达有关。(3)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)的应用能明显抑制SHR心脏组织的胶原沉积和纤维增殖,其潜在的机制与清肝滋肾方能明显抑制SHR心脏组织中CTGF、TGFβ1、Fibronectin、Collagen Ⅰ 和 Collagen Ⅲ 的蛋白表达有关。(4)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)可以有效抑制TNF-α、IL-6和PAI-1这三种炎症因子的在血清和心脏组织局部的表达,减轻心脏炎症。(5)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)可以有效缓解肥胖SHR心脏组织中线粒体显著肿胀、数目减少、表面积和周长增加、嵴紊乱、嵴减少、线粒体空洞等损害,并可以显著增加CS的表达量,其潜在的机制与清肝滋肾方能上调SHR心脏组织中HO-1、SOD2、TFAM、NRF-1有关。(6)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)明显减少心脏组织中活性氧簇(ROS)、脂质过氧化产物4-HNE、MDA以及蛋白质过氧化产物3-NT的含量,并且能抑制蛋白质羰基化的程度和脱氧核糖核酸(DNA)过氧化产物8-OhdG的表达,促进和增加NQO1、GCLM、GCLC、GSTpi、GSR、GPX4、SOD1、CAT 等的表达与活性,增加 GSH 的含量和 GSH/GSSG的值。(7)清肝滋肾方(尤其是高剂量组)能够显著增加心脏组织细胞浆、细胞核和线粒体中Nrf2的蛋白水平。结论:清肝滋肾方(尤其是高剂量组)可以有效地减肥、降压,显著改善肥胖SHR的心脏结构和功能,抑制心肌肥厚、心脏纤维化、心脏炎症和氧化应激,并能改善肥胖高血压导致的心脏组织线粒体结构和功能紊乱。其潜在机制可能与清肝滋肾方增加了心脏组织中Nrf2在细胞浆和线粒体中的蛋白表达,促进Nrf2入核,从而促进线粒体功能相关蛋白CS、HO-1、SOD2、TFAM、NRF-1 和抗氧化的相关蛋白 NQO1、GCLM、GCLC、GSTpi、GSR、GPX4、SOD1、CAT的表达和活性,并能抑制肥大相关蛋白ANP、BNP和MYH7,纤维化相关蛋白 CTGF、TGFβ1、Fibronectin、Collagen Ⅰ 和 Collagen Ⅲ,三种炎症因子 TNF-α、IL-6和PAI-1的表达有关。