黑果枸杞营养成分分析及其多糖对ARPE-19细胞的保护作用研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woyaodeaihaiyao
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:分析不同产地黑果枸杞营养成分并对其生药学特征进行初步研究,探讨其主要成分黑果枸杞多糖对氧化应激导致的视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞损伤的保护作用。方法:1.分别选择新疆、宁夏、甘肃、青海四种不同产地黑果枸杞按照国家标准对其水分、灰分、总蛋白、总脂肪、氨基酸及微量元素的含量进行测定,对其粉末进行性状、水试、显微和理化鉴定;2.采用热水浸提法提取黑果枸杞粗多糖,三氯乙酸法脱蛋白,过氧化氢法进行脱色,采用DEAE-52纤维素柱分离多糖,Sephadex G-100进行纯化及纯度鉴定,并利用气相-质谱联用法简单初步分析多糖组成及含量;3.CCK-8法检测不同浓度黑果枸杞多糖对ARPE-19细胞活力的影响;CCK-8法检测不同浓度H2O2诱导的ARPE-19细胞的存活率,构建氧化损伤模型;CCK-8法检测黑果枸杞多糖对H2O2诱导的ARPE-19细胞的存活率的影响;通过检测细胞内超氧化物气化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MD A)含量变化,揭示黑果枸杞多糖对ARPE-19细胞的抗氧化能力;Hoechst/PI染色并加入caspase抑制剂,观察H2O2诱导后ARPE-19细胞形态;流式细胞仪双染法考察黑果枸杞多糖对H2O2诱导的ARPE-19细胞凋亡情况;免疫印迹法检测正常情况、H2O2诱导和黑果枸杞多糖干预下细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、IL-1表达水平的差异。结果:1.本研究中不同产地黑果枸杞基本组成中有显著性差异(P<0.05),新疆产地钙、锌含量最高,宁夏产地铁含量最高,青海产地镁含量最高;除丙氨酸以外,其余氨基酸无显著性差异;显微结构上差异主要表现在石细胞和果皮表皮细胞;理化鉴别Rf值、斑点颜色和大小与对照品一致。2.水提醇沉法得到黑果枸杞粗多糖,三氯乙酸法脱蛋白率75.90%,过氧化氢法脱色率为39.90%;DEAE-52纤维素柱分离得到4个组分,Sephadex G-100层析柱纯度鉴定为分子量均匀的单一组分;气相-质谱法分析LMP-1-1单糖组成为葡萄糖、阿拉伯糖,其摩尔比为1:1.24;LMP-2-1单糖组成为甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖,其摩尔比为1.73:1.08:1;LMP-3-1单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,其摩尔比为2.20:1:1.07;LMP-4-1单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,其摩尔比为1.77:1:1.07。3.CCK-8结果表明,黑果枸杞多糖浓度为25-450μg·mL-1时,细胞存活率与对照组无统计学差异(P>0.05),黑果枸杞多糖浓度增高至500μg·mL-1时,细胞活性受抑制;H2O2可以明显降低A RPE-19细胞存活率,H2O2浓度为400μmol·L-1时,ARPE-19细胞半数存活,细胞存活率与对照组有统计学差异(P<0.01);黑果枸杞多糖浓度为25-400μg·mL-1时有保护作用,细胞存活率与对照组有统计学差异(P<0.01),其中黑果枸杞多糖浓度超过100μg·mL-1时保护作用下降;与模型组对比LMP-2-1组SOD、GSH-Px活力升高,MDA含量下降,检测指标含量与对照组有统计学差异(P<0.01);与模型组对比LMP-2-1低、中剂量组不同程度降低ARPE-19的总凋亡率,细胞凋亡率与对照组有统计学差异(P<0.05);与空白组对比,模型组NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达增加(P<0.05),LMP-2-1低、中剂量组NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达较模型组显著下降(P<0.01),高剂量组NLRP3蛋白表达较模型组显著下降(P<0.01),IL-1β蛋白表达较模型组下降(P<0.05)。结论:1.本研究中不同产地黑果枸杞在基本组成、金属元素含量和性状都有所不同。2.对黑果枸杞多糖进行提取分离纯化,其组成包括葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖。3.纯化后的黑果枸杞多糖可提高ARPE-19细胞的抗氧化能力,且没有剂量依赖性,可提高H2O2损伤的ARPE-19细胞的SOD、GSH-Px活力,降低MDA含量,并且可能通过下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β的蛋白表达,抑制ARPE-19细胞焦亡,进而防治年龄性黄斑病变。
其他文献
在教学管理方面,服务体系建设与制定教学计划细则,落实教学任务,考核教学服务体系,服务环节是互相联系有机结合的整体。教学服务体系的建立有利于教学活动的组织与管理,有利于保证
基于江西省赣抚平原农区6县市293户稻农的调查数据,分析转入耕地稻农的生产行为特征,采用随机前沿函数对稻农在不同转入规模下的耕地利用效率进行测算。研究发现:稻农耕地经营
一、童趣,积极情感的源泉 布鲁纳曾经说过:“学习的最好刺激,乃是对所学材料的兴趣。要想使学生上好课,就得千方百计点燃学生心灵上的兴趣之火。”因此,只有学生对学习内容感兴趣,
全球化时代背景下,世界的博弈已不再只是国家与国家之间的竞争,而是城市与城市之间的竞争。所以,未来一个国家的竞争力会体现在城市的竞争力,城市的作用、城市的地位就变得非
目前,处于社会转型期的中国,不仅社会结构发生了深刻的变化,从同质的多样性社会转型.而且这种转性使人们的行为方式、生活方式、价值观念都发生了明显的变化。这些变化一方面增强
“非常规”物理实验是利用学生熟悉的生活易得物品、材料或人体以及儿童玩具等开发进行的一类体现自创性、体验性、趣味性、简易性、生活化的物理实验教学活动。若根据物理教学过程中各教学环节的特点,合理地在初中物理教学中开展“非常规”物理实验教学,不但能让“从生活走向物理,从物理走向社会”的课程理念得到很好的贯彻,而且还可以促进物理知识与生活实际的联系,加强学生对物理知识的理解,提高学生学习物理的兴趣。本研究
人事档案存储电子化涉及面广,资金投入大,技术要求高,基础工作量大,但巨大的优势已使其成为不可回避的发展趋势。基层组织人事部门应充分认识,做好相关软件的开发和利用工作,积极推
<正> 两年前,西北新闻刊授学院的招生,是我15岁失学以后35岁以来梦寐以求的一个上学深造的机会,似乎“所有的抱负,志向,希望,前程”又一齐涌入脑海。鲁迅先生理想过的“尚能
广播和电视作为现代传播媒介,分别诞生于20世纪20年代和30年代的欧美发达国家。我国的人民广播事业产生于战争年代的1940年。哈尔滨市是较早设立广播电视的城市,哈尔滨电视台成
实行党风廉政建设责任制,是我们党在新形势下动员全党抓党风廉政建设和反腐败工作的一项基础性制度,是一项系统工程.是广大党员领导干部廉洁从政的基本规范.是加强党的作风建设,确